【摘 要】
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目的观察重组人转化生长因子—β1(rhTGF-p1)对人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549的作用,进一步探讨特发性肺纤维化发病机制。方法将体外培养的人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549用不同浓度rh
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目的观察重组人转化生长因子—β1(rhTGF-p1)对人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549的作用,进一步探讨特发性肺纤维化发病机制。方法将体外培养的人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549用不同浓度rhTGF-β1干预后,倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测TGF-β1对A549细胞增殖的影响。于48小时分别用Wester blotting和免疫荧光方法检测上皮细胞标志E-钙粘蛋白(E—Cad)以及间质细胞表型Fibronectin-EDA(Fn-EDA)表达变化,RT-PCR和免疫荧光方法检测纤维形成表型Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ)基因和蛋白表达变化。结果1倒置相差显微镜下观察,在TGF-β1的诱导下,细胞形态由鹅卵石状逐渐转变为梭性,随着TGF-β1浓度的增加,这种变化愈发明显,5ng/ml形态发生了很明显的变化,细胞和细胞之间的连接变得松散,TGF-β1诱导A549细胞向间质细胞形态转化。2 A549细胞加不同浓度TGF-β1分别培养24h、48h后,MTT法检测对细胞增殖作用影响,各浓度组与对照组相比,无统计学意义(p＞0.05)。3 TGF-β1下调A549上皮细胞表型E—Cad表达,各浓度组与对照组相比,均有统计学意义(p＜0.01),5ng/ml组与1ng/ml组相比,也有统计学意义(p＜0.05)。4 TGF-β1上调A549间质细胞表型Fn-EDA,各浓度组与对照组相比,均有统计学意义(p＜0.01),5ng/ml组与1ng/ml组相比,也有统计学意义(p＜0.01)。5 TGF-β1加强A549纤维形成表型Ⅰ型胶原的表达。5ng/ml与对照组相比,差异有统计学意义(p＜0.01)。结论rhTGF-β1在体外诱导Ⅱ型肺泡上皮系A549发生上皮细胞—间质转化(ephethlial-mesenchymal transition,EMT),支持在肺上皮细胞发生EMT的观点。
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