淡紫拟青霉固体发酵技术研究

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淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)是根结线虫、胞囊线虫等线虫的寄生菌,具有防治植物线虫病害的潜力。本文研究了淡紫拟青霉固体发酵基质、固体发酵工艺和淡紫拟青霉应用。固体发酵基质的初步筛选,首先根据淡紫拟青霉36-1菌株在小麦粉、玉米粉、稻谷粉琼脂培养基上生长差异,确定淡紫拟青霉固体发酵的主要营养物质为玉米粉;以发酵产物孢子含量为指标,兼顾发酵原料成本,筛选出淡紫拟青霉固体发酵比较理想的基本配方:玉米秆:玉米粉为1:1,米糠:玉米粉为1:1(重量比)。淡紫拟青霉36-1固体发酵菌种配方筛选是以发酵产物易分散、不易污染、孢子含量和产孢产量等为指标,确定固体发酵菌种的配方为:米糠/玉米粉/清水=0.3:0.3:0.4(重量比)。菌种配方接种后在25℃条件下发酵10d后,孢子含量为2.29×10~9(个/g湿重),产孢量为3.12×10~9(个/g投入干料)。淡紫拟青霉36-1固体发酵化生产配方是以成本、孢于含量、产孢产量等为指标。单因子试验表明,水分含量和外加氮源对淡紫拟青霉36-1菌株的生长及发酵产物孢子含量和产量影响比较大生,水分含量为60%比较好,有利于菌丝生长和产孢;外加氮源中以加硫酸铵含量为0.5%左右比较好,可显著提高发酵产物的孢子含量和产孢量;添加蔗糖则影响不大。以玉米秆、米糠、玉米粉、硫酸铵为因子进行正交试验表明,影响发酵产物产孢量大小依次为:硫酸铵>玉米秆>米糠>玉米粉。经不同因子不同水平对产孢量的影响分析与验证,生产配方最终确定为:玉米秆/米糠/玉米粉=0.6/0.4/1.5(重量比),硫酸铵含量为0.1%,加水含量50.0%。生产配方接种后在25℃条件下发酵10d后,孢子含量为7.29×10~9(个/g湿重),产孢量为7.77×10~9(个/g投入干料)。淡紫拟青霉固体发酵工艺研究主要是接种量、发酵周期及固体发酵产物室温下贮存时间对孢子萌发的影响。当菌种孢子含量达10~9(个/g湿重)以上时,接种量为1.0%;在温度为25℃,自然湿度条件下,淡紫拟青霉发酵周期为10-12d;室温下贮存时间对孢子萌发影响很大,保存时间2-11个月,孢子萌发率仍保持在90%左右。耐药性测定表明,淡紫拟青霉36-1对多菌灵、百菌清、苯醚甲环唑、丙环唑等很敏感,因此不宜和这些杀菌剂混用,但对常用杀虫剂阿维菌素和辛硫磷不敏感,可以考虑和这些杀虫剂混用,以提高防治线虫的效果。
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