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目的:研究一氧化氮供体JS-K通过CIP2A/PP2A/ERK信号轴在肝癌Hep G2细胞凋亡诱导中的作用。方法:（1）NO供体JS-K对人肝癌Hep G2细胞凋亡的影响:将细胞分为对照组、JS-K 2.5,5和10μM组。DAPI染色检测Hep G2细胞核形态变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测Hep G2细胞凋亡率。（2）NO供体JS-K对CIP2A-PP2A-ERK信号轴相关蛋白的影响:将细胞分为对照组、JS-K 2.5,5和10μM组;免疫荧光法检测细胞内CIP2A和p-ERK蛋白的表达;直接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测PP2A蛋白的表达;Western blot方法检测CIP2A、p-PP2A、PP2A、p-ERK1/2、ERK1/2、p-c-Raf、c-Raf、p-MEK1/2、MEK1/2、p-p90RSK、p90RSK、p-Elk-1、Elk-1、p-c-Myc、c-Myc、p-c-Fos、c-Fos蛋白的表达。将细胞分为对照组、U0126（MEK1/2抑制剂）单用组（10μM）、JS-K单用组（10μM）、U0126+JS-K组;Annexin VFITC/PI双染法检测Hep G2细胞凋亡率;直接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测p-ERK蛋白的表达;Western blot方法检测p-ERK1/2、ERK1/2、p-c-Raf、c-Raf、p-MEK1/2、MEK1/2、p-p90RSK、p90RSK、p-Elk-1、Elk-1、p-c-Myc、c-Myc、p-c-Fos、c-Fos蛋白的表达。（3）CIP2A对NO供体JS-K诱导肝癌细胞凋亡中PP2A蛋白表达的影响:将CIP2A低/高表达的质粒,用脂质体转染至肝癌细胞中,Western blot方法验证细胞中CIP2A的表达情况。将细胞分为阴性对照（NC）组、JS-K+阴性对照（JS-K+NC）组、sh RNA CIP2A组、JS-K+sh RNA CIP2A组;或是NC组、JSK+NC组、过表达CIP2A质粒（pc DNA CIP2A）组、JS-K+过表达CIP2A质粒（JS-K+pc DNA CIP2A）组,Western blot方法检测Hep G2细胞中PP2A蛋白表达。（4）PP2A对NO供体JS-K诱导肝癌细胞凋亡中ERK通路的影响:将PP2Ac低/高表达的质粒,用脂质体转染至肝癌细胞中,Western blot方法验证细胞中PP2A的表达情况。将细胞分为NC组、JS-K+NC组、si RNA PP2Ac组、JS-K+si RNA PP2Ac组;或是NC组、JS-K+NC组、pc DNA PP2Ac组、JSK+pc DNA PP2Ac组;Annexin V-FITC/PI双染法检测Hep G2细胞凋亡率;Western blot方法检测p-c-Raf、c-Raf、p-MEK1/2、MEK1/2、p-ERK1/2、ERK1/2、p-Elk-1、Elk-1、p-c-Myc、c-Myc、p-c-Fos、c-Fos蛋白的表达。（5）JS-K通过NO对CIP2A-PP2A-ERK信号轴相关蛋白的影响:将细胞分为对照组、JS-K 2.5,5和10μM组,DAF-FM DA标记通过流式细胞仪检测细胞内NO水平;Hep G2细胞提前2 h加入50μM的Carboxy-PTIO（NO清除剂）溶液进行预处理,并将细胞分为对照组、Carboxy-PTIO组、JS-K组（10μM）、JS-K+Carboxy-PTIO组,Western blot方法检测CIP2A、PP2A、pERK1/2、ERK1/2、p-c-Raf、c-Raf、p-MEK1/2、MEK1/2、p-p90RSK、p90RSK、p-Elk-1、Elk-1、p-c-Myc、c-Myc、p-c-Fos、c-Fos蛋白的表达。结果:（1）DAPI染色结果显示,与对照组相比,JS-K 2.5,5和10μM组细胞出现染色质浓缩、核碎裂等凋亡特征的数量增加。Annexin V-FITC/PI双染结果显示,与对照组相比,JS-K 2.5,5和10μM组细胞凋亡率明显增加（P＜0.01）。（2）免疫荧光结果显示,与对照组相比,JS-K组CIP2A和p-ERK荧光强度减弱;直接免疫荧光标记法结果显示,与对照组相比,JS-K 2.5,5和10μM组PP2A的蛋白表达增强（P＜0.05,P＜0.01）;Western Blot结果显示,与对照组相比,JS-K 2.5,5和10μM组CIP2A的表达显著降低（P＜0.05,P＜0.01）,PP2A的表达显著升高（P＜0.01）,PP2A、ERK1/2、c-Raf、MEK1/2、p90RSK、Elk-1、c-Myc和c-Fos蛋白磷酸化水平显著降低（P＜0.05,P＜0.01）。加入U0126后,Annexin V-FITC/PI双染结果显示,与JS-K 10μM组相比,JS-K+U0126组细胞凋亡率增加（P＜0.05）;直接免疫荧光标记法结果显示,与JS-K 10μM组相比,JS-K+U0126组p-ERK的蛋白表达减弱（P＜0.01）;Western Blot结果显示,与JS-K 10μM组相比,JS-K+U0126组中ERK1/2、MEK1/2、p90RSK、Elk-1、c-Myc和c-Fos蛋白磷酸化水平显著降低（P＜0.05,P＜0.01）。（3）Western Blot结果显示,低表达CIP2A后,与JS-K+NC组相比,JSK+sh RNA CIP2A组细胞内PP2A表达升高（P＜0.05）;过表达CIP2A后,与JS-K+NC组相比,JS-K+pc DNA CIP2A组细胞内PP2A表达降低（P＜0.01）。（4）Annexin V-FITC/PI双染结果显示,低表达PP2A后,与JS-K+NC组相比,细胞凋亡率下降（P＜0.01）;过表达PP2A后,与JS-K+NC组相比,细胞凋亡率上升（P＜0.01）。Western Blot结果显示,低表达PP2A后,与JSK+NC组相比,JS-K+si RNA PP2A组细胞内ERK1/2、c-Raf、MEK1/2、Elk-1、c-Myc和c-Fos蛋白的磷酸化水平显著升高（P＜0.05,P＜0.01）;过表达PP2A后,与JS-K+NC组相比,JS-K+pc DNA PP2A组细胞内ERK、c-Raf、MEK1/2、Elk-1、c-Myc和c-Fos蛋白磷酸化水平显著下降（P＜0.05,P＜0.01）。（5）DAF-FM DA标记结果显示,与对照组相比,JS-K 2.5,5和10μM组中NO水平显著提高（P＜0.05,P＜0.01）;Western Blot结果显示,与JS-K 10μM组相比,JS-K+Carboxy-PTIO组中CIP2A蛋白的表达显著升高（P＜0.01）,PP2A蛋白的表达显著降低（P＜0.01）,ERK1/2、c-Raf、MEK1/2、p90RSK、Elk-1、c-Myc和c-Fos蛋白的磷酸化水平显著升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论:JS-K通过在Hep G2细胞内释放NO,下调CIP2A蛋白的表达而激活PP2A,从而抑制c-Raf-MEK-ERK信号通路及其下游靶蛋白,最终诱导肝癌Hep G2细胞凋亡。