【摘 要】
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背景:胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类健康。患者的预后与确诊时的临床分期密切相关,目前早期胃癌患者的5年生存率可以达到90%,但是中晚期患者的5年生存率却低于30%。因此早发现、早诊断和早治疗,对有效改善胃癌患者的预后、降低患者的病死率至关重要。在临床上,胃癌早期确诊的依据是胃镜以及组织病理学活检的结果,但由于其侵袭性大、费用高,限制了其在胃癌筛查和早期诊断中的应用。因此更加深入的
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背景:胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类健康。患者的预后与确诊时的临床分期密切相关,目前早期胃癌患者的5年生存率可以达到90%,但是中晚期患者的5年生存率却低于30%。因此早发现、早诊断和早治疗,对有效改善胃癌患者的预后、降低患者的病死率至关重要。在临床上,胃癌早期确诊的依据是胃镜以及组织病理学活检的结果,但由于其侵袭性大、费用高,限制了其在胃癌筛查和早期诊断中的应用。因此更加深入的了解胃癌发生和进展过程中的具体分子机制,寻找胃癌无创性血清标志物显得尤为重要。LncRNA是一类在基因表达调控中发挥重要作用的长链非编码RNA,但是其在胃癌发生和进展中的具体分子机制还有待进一步探讨。有研究发现lnc-HOXC-AS3在脑胶质瘤和乳腺癌中高表达,且发挥促进肿瘤发生和进展的作用。在胃癌中,升高的lnc-HOXC-AS3可以结合YXB1蛋白促进胃癌的发生,但是其是否通过ce RNA机制进一步影响胃癌的发生和进展还需要深入研究。目的:探讨lnc-HOXC-AS3在胃癌中的表达模式,以及其是否通过ce RNA机制,即竞争性结合mi R-15b-5p,阻断其对下游E2F3的靶向作用的具体机制。内容:1.利用已有的数据库,通过生物信息学方法筛选胃癌组织中异常表达的lnc RNA;2.在收集的90例胃癌组织和相应癌旁组织中验证数据库筛选的靶标lnc RNA的表达情况,多种胃癌细胞系进一步验证;3.探讨筛选的靶标lnc RNA对胃癌细胞功能的影响,分别用CCK-8和Transwell实验检测细胞的增殖和迁移能力;Western blot观察EMT相关分子的改变情况;4.生信分析预测靶标lnc RNA,lnc-HOXC-AS3的下游的mi RNA,mi R-15b-5p;进一步预测mi R-15b-5p的下游靶基因,统计学分析胃癌组织中靶基因和lnc-HOXC-AS3的表达相关性;5.双荧光素酶报告基因实验验证预测的mi R-15b-5p与上游lnc-HOXC-AS3和下游靶基因是否存在相互作用;6.进一步探讨lnc-HOXC-AS3在胃癌细胞中是否通过ce RNA机制发挥作用。结果:1.通过不同的数据库筛选和验证,确定lnc-HOXC-AS3为本研究的研究目标;2.RTFQ-PCR结果显示在胃癌组织中lnc-HOXC-AS3的表达量明显高于相应的癌旁组织,多种胃癌细胞系中lnc-HOXC-AS3的表达量也升高;在胃癌细胞中,lnc-HOXC-AS3可以促进细胞的增殖和迁移;3.根据数据库的筛选原则,分别选择mi R-15b-5p和E2F3为lnc-HOXC-AS3以及mi R-15b-5p的下游靶标;进一步胃癌组织中表达量相关性统计发现lnc-HOXC-AS3的表达量与E2F3呈正相关;4.双荧光素酶报告基因实验分别证明mi R-15b-5p和lnc-HOXC-AS3、mi R-15b-5p和E2F3之间可能存在相互作用;5.在胃癌细胞中lnc-HOXC-AS3,通过竞争性结合mi R-15b-5p,阻断其对下游E2F3的调控,进而影响胃癌的发生和进展,即lnc-HOXC-AS3在胃癌中可以发挥ce RNA的作用机制。结论:胃癌组织中异常表达的lnc-HOXC-AS3,在胃癌细胞中通过竞争性结合mi R-15b-5p,阻断mi R-15b-5p对下游E2F3的调控,进而影响细胞的增殖和迁移,综上,认为lnc-HOXC-AS3可能通过lnc-HOXC-AS3/mi R-15b-5p/E2F3轴影响胃癌的发生和进展。
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