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舌鳞癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一,发病率占口腔癌的39.95%,恶性程度较高,生长快,易发生早期淋巴结转移。目前临床多采用以手术治疗为主,放、化疗为辅的综合治疗方法,但术后复发率及转移率均较高,因此寻求新的治疗途径及有效的治疗药物具有很大的临床意义。中药野黄芩苷又名灯盏花乙素,是从黄芩茎叶及灯盏细辛等药物中分离得到的黄酮类化合物。已有研究证实黄酮类化合物在抗炎、抗微生物、抗变态反应、抗肿瘤等多方面都有一定的药理作用[1]。本研究观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞细胞周期及Fas/FasL介导的细胞凋亡的影响,旨在探讨野黄芩苷可能抗肿瘤的作用机制,为野黄芩苷药理作用的进一步研究提供理论和实验依据。目的:体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞株,检测野黄芩苷作用的人舌鳞癌细胞细胞周期改变及Fas、FasL蛋白的表达情况,观察野黄芩苷对人舌鳞癌细胞细胞增殖及凋亡的影响,探讨野黄芩苷的抗肿瘤作用。方法:1、人舌鳞癌Tca8113细胞株购于南京凯基生物科技有限公司,进行体外培养,用于实验。2、实验分组:分为对照组、不同浓度野黄芩苷药物组。对照组用含10%胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养液培养舌鳞癌细胞;野黄芩苷组根据预实验结果选择用浓度为80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的野黄芩苷培养液处理细胞。3、采用流式细胞技术观察野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48小时后细胞周期的变化。4、采用免疫细胞化学法观察野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48小时后Fas、FasL的表达情况。5、采用蛋白印迹(Western-blot)技术检测野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48小时后Fas、FasL蛋白的表达情况。6、数据处理采用SPSS17.0统计学软件进行,对结果采用单因素方差分析,P <0.05表示差异有统计学意义。结果:1、流式细胞术检测结果显示:随着加入野黄芩苷浓度的增加,舌鳞癌细胞G1%(DNA合成前期细胞所占百分比)升高,而S%(DNA合成期细胞所占百分比)降低,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);且这种变化与药物浓度的变化有关,其中以160μg/ml浓度的野黄芩苷抑制作用最强。2、免疫细胞化学染色结果:80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml野黄芩苷作用于Tca8113细胞48h后,Fas和FasL阳性细胞胞浆和胞膜呈棕黄色。对照组细胞胞浆着色很浅,随着药物浓度的增加,细胞胞浆棕黄色逐渐增强,免疫细胞化学染色阳性程度明显高于未经野黄芩苷作用的对照组。经统计学分析,各组之间差异具有统计学意义(P<0.05),以160μg/ml浓度的野黄芩苷作用最强。3、Western-Blot检测结果:80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml野黄芩苷作用于Tca8113细胞48h后,Western-Blot检测对照组Fas、FasL蛋白表达水平较低,不同浓度野黄芩苷药物组随着药物浓度的增加,Fas、FasL蛋白表达量有增高趋势,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、野黄芩苷可通过阻止人舌鳞癌Tca8113细胞从G1期进入S期,抑制肿瘤细胞增殖;2、野黄芩苷可能通过提高人舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白的表达诱导凋亡而达到抗肿瘤的作用。