双生病毒(geminiviruses)引起的病害在世界范围内广泛发生,在我国其引起的番茄曲叶病发生面积大、发展迅速、危害严重。但是目前我国对该类病害还缺乏有效的控制策略。RNA沉默是近年发现的植物对病毒的自然抗性机制,利用RNA沉默技术进行植物抗双生病毒基因工程研究,有望获得广谱高抗的转基因植物,为有效控制这类病毒病害奠定基础。本文利用RNA干扰技术进行番茄和普通烟抗双生病毒基因工程研究,以在植物体内转录出RNA沉默的高效诱导因子dsRNA为目标,将引起我国番茄曲叶病害的3种主要双生病毒番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)、台湾番茄曲叶病毒(Tomato leaf curl Taiwan virus, ToLCTWV)和中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus, TYLCCNV)的部分复制酶基因以反向重复的方式与拟南芥内含子相连,并定向插入到植物表达载体pBIN438上35S启动子下游；以农杆菌介导法转化番茄和烟草。目前获得阳性转基因烟草,并对这种转基因烟草进行了抗病性测定。用TYLCV接种47株TO代阳性转基因烟草,症状观察和TAS-ELISA检测表明,不同TO代转基因烟草对TYLCV的抗性程度不同。转化番茄实验正在进行中。为了能更好的控制番茄曲叶病害的发生,本实验同时对TYLCV的部分rep基因构建反向重复植物表达载体并转化普通烟和番茄,目前已获得阳性转SH2hp-rep普通烟TO代27株,对TYLCV的抗性正在测定中。番茄转化还在进行中。另外,本文利用滚环扩增(RCA技术在云南采集的89个样品中,发现一种与云南烟草曲叶病毒(Tobacco leaf curl Yunnan virus, TbLCYnV)伴随的重组缺陷型小分子。该小分子大小为754bp,含有大多数nanoviruses中保守的九核苷酸TAGTATTAC和TYLCCNV卫星betasatellite的卫星保守区的互补序列,不编码蛋白。致病性测定实验发现,该重组缺陷型小分子可与辅助病毒一起复制,推迟本氏烟发病,但对症状和病毒积累量无很大影响。推测该分子是双生病毒进化过程中的一个中间产物。