本文主要从以下几个部分展开论述：　　第一部分 携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体转染脂肪干细胞　　目的：　　采用携带绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）基因的慢病毒作为表达载体转染大鼠脂肪干细胞（adipose derived stromal cells,ADSCs），转染后观察细胞荧光强度、细胞形态及体外活性，探讨GFP标记ADSCs的有效性。　　方法：　　将冻存的大鼠ADSCs进行复苏、传代扩增，用携带GFP基因的慢病毒载体转染ADSCs，转染过程中观察荧光强度、细胞形态及增殖速度，慢病毒感染72h后用嘌呤霉素筛选获得稳定表达GFP的ADSCs。　　结果：　　1、未标记的ADSCs大部分细胞形态呈长梭形，与成纤维细胞形态相似，部分细胞形态不规则，细胞呈极性排列，立体感较好。经传代后，细胞活力仍较好，以1∶2的比例传代，约48h即可长满25c m2细胞培养瓶。　　2、慢病毒转染ADSCs48小时后，可见明显GFP表达，随着时间的推移，GFP的表达逐渐增多。经嘌呤霉素筛选后可得到稳定表达GFP的ADSCs细胞株，传代后荧光强度无明显减弱，且细胞形态和增殖速度与未标记细胞相比无明显差异。　　结论：　　慢病毒介导的GFP转染对大鼠ADSCs细胞形态和增殖速度无明显影响，可有效地标记ADSCs，是切实可行的细胞标记方法。　　第二部分 脂肪干细胞移植对PCOS大鼠治疗作用的初步观察　　目的：　　分别通过卵巢原位注射和尾静脉注射的方法移植ADSCs，探讨ADSCs移植后PCOS大鼠卵巢形态结构异常及内分泌紊乱的改善情况。　　方法：　　1、采用皮下注射DHEA的方法建立PCOS大鼠模型，随机分为PCOS组、尾静脉注射组、卵巢原位注射组，每组各8只，另选同批正常大鼠8只设为空白对照组。尾静脉注射组和卵巢原位注射组分别通过尾静脉和卵巢原位注射法移植标记GFP的脂肪干细胞。　　2、细胞移植后进行阴道涂片观察大鼠动情周期变化，分别在ADSCs移植后1周、1月处死各组大鼠，观察卵巢大体外观，通过HE染色法观察各组卵巢组织形态结构，并对各级卵泡、闭锁卵泡、黄体进行计数，测量卵泡颗粒层及卵泡膜厚度。　　3、ELISA法检测各组大鼠血清睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）水平。　　结果：　　1、对照组大鼠动情周期基本正常，PCOS大鼠动情周期紊乱，ADSCs移植1月后两移植组各有一半大鼠恢复正常动情周期。　　2、对照组大鼠卵巢表面鲜红，未见明显扩张卵泡。PCOS大鼠卵巢表面苍白，可见大小不等扩张卵泡，卵巢体积增大。尾静脉注射组卵巢表明光滑，外观与正常卵巢基本相同。卵巢原位注射组部分大鼠卵巢注射部位出现包膜薄，内含清亮或暗红色液体的卵巢囊肿。　　3、卵巢HE切片观察结果显示，与对照组相比，PCOS组成熟卵泡、黄体减少，闭锁卵泡增多（P＜0.05）。移植1周、1月，与PCOS组相比，两细胞移植组闭锁卵泡减少，黄体增加（P＜0.05），但两种移植方法比较无明显差异（P＞0.05）。移植1月，尾静脉注射组成熟卵泡较PCOS组明显增多（P＜0.05）。　　4、与对照组相比，PCOS大鼠卵泡颗粒层变薄，卵泡膜增厚（P＜0.05）。移植1周，与PCOS组相比，两移植组颗粒层厚度明显增厚，卵泡膜明显变薄（P＜0.05）,两种移植方法比较无明显差异（P＞0.05）。移植1月，与PCOS组相比，两移植组颗粒层增厚，原位注射组卵泡膜变薄（P＜0.05）。　　5、与正常对照组相比，PCOS组大鼠T、LH、LH/FSH明显升高（P＜0.05）。移植1周，两移植组T、LH、LH/FSH较PCOS组低（P＜0.05）。移植1月，与PCOS组相比，两移植组LH明显降低（P＜0.05）。两种移植方法比较无明显差异（P＞0.05）。　　结论：　　脂肪干细胞移植对PCOS有一定的治疗作用，可改善内分泌功能紊乱，修复PCOS大鼠异常的卵巢组织形态结构，促进卵泡发育，改善排卵功能。　　第三部分 脂肪干细胞移植治疗PCOS大鼠机制的初步研究　　目的：　　通过移植标记GFP的ADSCs，追踪ADSCs在大鼠卵巢的归巢及其他器官的分布情况，检测血清脂联素和瘦素浓度以及卵巢组织TGF-β1和C TGF表达的变化，初步探讨ADSCs移植治疗PCOS的可能机制。　　方法：　　1、分别于ADSCs移植1周和1月取大鼠卵巢、子宫、肝、肾、肺行冰冻切片，荧光显微镜下观察ADSCs的分布情况。　　2、用Elisa法检测各组大鼠血清脂联素、瘦素水平的变化。免疫组化法检测卵巢组织纤维化因子TGF-β1和CTGF的表达。　　结果：　　1、尾静脉注射组ADSCs散在分布于卵巢间质，子宫、肾、肝也可见ADSCs分布，但以卵巢最为多见，肺部未见明显荧光。卵巢原位注射组ADSCs局限分布于卵巢间质，除卵巢及部分子宫可见荧光外，其他组织未见明显荧光。两移植组移植1月较1周ADSCs在卵巢的分布增多。　　2、与对照组相比，PCOS大鼠血清脂联素水平降低，瘦素升高（P＜0.05）。移植1周后，与PCOS组相比，两移植组血清脂联素升高，瘦素水平降低，但差异无统计学意义（P＞0.05）。移植1月后，两移植组的脂联素水平均高于PCOS组（P＜0.05），且两种移植方法比较无差异（P＞0.05）。移植1月后，尾静脉注射组瘦素水平低于PCOS组（P＜0.05），原位注射组瘦素水平与PCOS组比较无明显差异（P＞0.05）。　　3、CTGF、TGF-β1主要在卵巢的卵母细胞、卵泡膜细胞、颗粒细胞、黄体细胞的胞浆中表达，其中卵母细胞、颗粒细胞、黄体细胞中C TGF、TGF-β1的表达，4组比较均无明显差异（P＞0.05）。卵泡膜细胞中CTGF、TGF-β1的表达，PCOS组明显高于对照组（P＜0.05）。ADSCs移植1周、1月后，与PCOS组相比，两移植组卵泡膜细胞中CTGF、TGF-β1的表达均明显降低（P＜0.05），但两种移植方法比较无明显差异。　　结论：　　ADSCs具有向PCOS大鼠卵巢归巢的能力，ADSCs可能通过升高血清脂联素而降低瘦素水平，修复卵巢纤维化从而达到改善卵巢功能的作用。