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橙皮素(hesperetin)为芸香科柑橘属植物果实提取物,是广泛存在于柚子和橙子中二氢黄酮类化合物,具有广泛的药理学特性,包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤等活性。橙皮素口服以后生物利用度较好,但是半衰期较短,口服给药以后体内消除较快,为了维持有效血药浓度,需要频繁给药,这一缺点限制了其在临床上的应用。为了克服这一缺点,本课题组通过化学合成的方法,合成了一系列的橙皮素衍生物并对其药理活性进行了筛选。本课题组前期研究发现7,3′-二甲氧基橙皮素(7,3′-dimethoxy hesperetin,DMHP)具有较强抗炎活性,对A A大鼠继发性炎症具有良好的治疗作用。前期研究还发现8-异丙胺亚甲基橙皮素(IPHP),在体外具有良好的抗炎活性,对于由LPS刺激RAW264.7细胞产生的TNF-α和IL-6具有明显的抑制作用。该实验的目的是建立IPHP在大鼠体内的药动学研究方法,对其进行早期药动学研究,同时利用MDCK细胞模型来模拟小肠上皮细胞对IPHP的吸收情况,通过对MDCK细胞膜上转运蛋白,如P糖蛋白(P-gp)、多药耐药蛋白(MRP2)的研究来探讨其吸收及外排机制,为以后的药理学研究提供依据,为将来的临床前研究提供思路。本实验的主要内容包括以下几个方面:1.IPHP在大鼠体内的药动学研究40只SD大鼠随机分为:橙皮素组(100mg/kg),IPHP低,中,高剂量组(25,50,100mg/kg)和IPHP静脉注射组(25 mg/kg),每组8只。灌胃,静脉给药后不同时间点大鼠眼底静脉丛取血,用本实验建立的HPLC法测定血浆中的橙皮素和IPHP的浓度,根据所得的血浆药物浓度-时间曲线,计算药物代谢动力学参数,分别计算IPHP在低中高3个不同浓度的Tmax(h):2.3±0.67、2.40±0.55、2.10±0.55;t1/2(h):6.37±1.91、6.45±1.93、6.61±1.98;Cmax(μg/ml):1.15±0.32、2.60±0.70、4.36±1.18;AUC(mg/L·h):9.34±1.68、22.98±4.14、41.63±7.49。橙皮素的Tmax(h)为0.35±0.11,t1/2(h):3.07±1.12;Cmax(ug/ml):4.56±1.09,AUC(mg/L·h):50.23±12.22。与等剂量组的橙皮素相比,IPHP的半衰期明显延长,血药浓度液维持在较高的水平,达峰时间延迟,相对生物利用度提高了。2.IPHP在MDCK单层细胞模型上的吸收转运实验的研究MTT法筛选出安全的适合跨细胞膜转运的药物浓度(120μΜ以内),药物跨膜转运的实验分组:7.5,15,30,60,120μΜ五个药物浓度组以及温度,p H,转运蛋白抑制剂组。探讨药物浓度、p H、温度、P-gp抑制剂维拉帕米、MRP2抑制剂MK-571和丙磺舒对IPHP在体外细胞模型上跨膜转运的影响。实验取的样品通过上述建立的HPLC法测定血浆中的药物的浓度,根据所得的血浆药物浓度-时间曲线,计算药物浓度,根据公式Papp=(d Q/dt)/A×C0和ER=Papp(BL-AP)/Papp(AP-BL)计算不同浓度药物的Papp(AP-BL)(×10–5)(cm·s-1):1.49±1.20、2.81±1.20、3.28±0.45、3.45±1.30、3.47±1.27。Papp(BL-AP)(×10–5)(cm·s-1):2.12±0.728、3.87±0.364、4.27±1.16、4.08±2.68、4.15±3.66。外排率分别为:1.41、1.37、1.3、1.18、1.19。温度和p H对其转运均有影响,而P-gp抑制剂对于IPHP的转运没有明显的影响,MRP2抑制剂在一定程度上增加了IPHP的转运量。IPHP在MDCK细胞模型上的转运方式主要是被动扩散,且其转运不受P-gp外排蛋白影响,而外排蛋白MRP2可能参与了IPHP的外排转运。