旋覆花提取物抑菌活性评价与分析

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本论文对菊科植物旋覆花(Inula japonica)提取物对植物病原真菌的抑菌活性及主要抑菌化合物的分离纯化进行了研究。采用菌丝生长速率法、孢子萌发法、盆栽幼苗法和离体叶片法对旋覆花各部位粗提物进行了抑菌活性测定,结果表明:旋覆花各部位提取物对黄瓜霜霉病菌、黄瓜白粉病菌、黄瓜炭疽病菌、黄瓜灰霉病菌、番茄早疫病菌、马铃薯(番茄)晚疫病菌和番茄叶霉病菌均有不同程度的抑菌活性,其中旋覆花花序提取物的抑菌活性较高。针对旋覆花花序优化了提取的条件,最终确定了一套简便、经济且有效的提取旋覆花花序的方法,即将花序粉碎过40目筛后,用95%乙醇在50℃条件下提取2次,每次3h,第1次干粉质量(g)与溶剂体积(mL)比为1:10,第2次为1:8,抽滤得提取液,利用旋转蒸发仪(60~℃、0.1 MPa)浓缩至无溶剂滴出。按此方法提取花序干粉25 kg,得到粗提物浸膏2.55kg,收率为10.21%.将旋覆花花序粗提物浸膏用蒸馏水饱和悬浮,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水饱和正丁醇等不同极性的溶剂萃取,各萃取液经减压浓缩得到5种萃取相浸膏,并进行了抑菌活性测定。结果表明,各萃取组分对黄瓜霜霉病菌、黄瓜白粉病菌、黄瓜灰霉病菌、番茄早疫病菌、马铃薯(番茄)晚疫病菌均有不同程度抑菌活性,其中氯仿萃取组分的抑菌活性较强。利用柱层析、薄层层析、重结晶等分离技术,从氯仿萃取组分中分离到晶体J2,经熔点测定,并运用紫外、红外、核磁等光谱鉴定后,确定为1-O-乙酰基大花旋覆花内酯(ABL)。通过高效液相色谱仪测定,晶体J2的纯度达99.5%以上,同时测定了旋覆花花序粗提物浸膏中ABL的含量为2.45%,并依此推算出了花序中ABL的含量约为0.25%。测定了化合物ABL对6种植物病原菌的抑菌活性,抑菌效果显著,在浓度为0.1 mg/mL时,化合物ABL对番茄晚疫病菌休止孢萌发抑制率可达100%。将花序粗提物浸膏、无水乙醇、乳化剂吐温80按照200:1000:1(w:v:v)的比例充分混合得到0.62%1-O-乙酰基大花旋覆花内酯乳油(0.62%ABL乳油),将其用于防治温棚黄瓜霜霉病,得到了较好的防治效果,表明其具备开发为优良植物源杀菌剂的潜力。
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