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一、研究背景与目的 脾虚证反映了以消化系统功能障碍为主的全身性综合病理状态,有消化吸收功能障碍、胃肠屏障功能低下等表现。脾虚证主要以益气健脾法治疗,代表药物有党参、白术、黄芪、茯苓、甘草等,以其为主组成的经典方剂有四君子汤、补中益气汤、参苓白术散、黄芪建中汤等。许多研究表明,脾虚患者和脾虚动物存在肠上皮细胞形态和功能的病变,通过益气健脾方药治疗可得到明显改善。表明这类中药有维持肠上皮完整、改善上皮细胞功能和保护肠粘膜等作用。但国内对益气健脾中药肠粘膜修复作用机理的研究不多。 本实验室近年来开展了相关研究,以化学方法提取得到党参、白术、黄芪和甘草的提取部位18个,发现一些提取部位能促进小肠隐窝IEC-6细胞增殖、移行、分化,促进细胞内鸟氨酸脱羧酶(ODC)、绒毛蛋白、转铁蛋白等表达,提高多胺(腐胺)含量等,最后筛选出3个有较强药理活性的提取部位白术AMPS-Ⅱ、黄芪总皂苷、甘草总黄酮,并对其进行了提取工艺研究,各有效组分均达到中药新药有效部位的要求,在动物实验中以均匀设计法得出其最佳配伍比例,设立了由白术AMPS-Ⅱ、黄芪总皂苷、甘草总黄酮组成的白术黄芪方提取物新组方(以下简称白术黄芪方)。组方思路源自金元医家刘完素的白术黄芪汤,其《素问病机气宜保命集·泻痢论》曰:“白术黄芪汤:服前药,痢虽已除,犹宜此药和之。……白术一两,黄芪七钱,甘草三钱。”按原文所述,白术黄芪汤主要在泻痢已除之后应用,以达调理脾胃、“和之”的目的,类似泻痢恢复期和溃疡性结肠炎缓解期的治疗。其疗效可能与促进肠粘膜修复、保护肠上皮屏障的相关。因此益气健脾中药的作用靶点除了ODC和多胺等机制外,肠上皮细胞连接作为肠粘膜屏障的重要组成部分也可能是其靶点之一。本实验室最近观察了白术黄芪方对细胞紧密连接及其相关蛋白ZO-1的影响,结果表明该方可促进肠上皮Caco-2细胞增殖,增强ZO-1蛋白表达,白术AMPS-Ⅱ和黄芪皂苷可促进肠上皮细胞连接的形成从而促进细胞分化(尚未发表资料)。 在以上工作基础上,本研究根据白术黄芪汤的临床功用,选择肠粘膜损伤性疾病溃疡性结肠炎(属于中医“下痢”范畴)为研究对象,考察白术黄芪方经过药物提取、筛选、组方后的自术黄芪方,新方与原方汤剂比较,其适应症、药效、毒性等情况。研究目的是观察白术黄芪方是否使疗效增加而不引起毒性增加,是否保留其治疗泻痢恢复期脾胃虚弱的功效,是否保持中药配伍组方能增效的特点,其作用机理是否与肠上皮细胞紧密连接及其相关蛋白(选择构成紧密连接的重要蛋白claudin-1、occludin)有关等。研究内容包括建立适用于中医药治疗溃结病程发展特点的动物模型;比较白术黄芪方和白术黄芪汤治疗溃疡性结肠炎的疗效及其毒性;观察白术黄芪方对溃疡性结肠炎不同病变阶段的疗效及其对claudin-1、occludin蛋白的影响,以考察该方益气