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目的:应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,靶向沉默胃癌MGC-803细胞的ARID1A基因后,利用realtime PCR、Western blot检测CyclinD1、MMP1、C-jun的表达,探讨在胃癌MGC-803细胞中,CyclinD1、MMP1、C-jun是否是ARID1A作用的下游靶基因。从而为进一步探讨ARID1A对胃癌MGC-803细胞的分化、增殖、细胞周期等生物学行为影响的可能分子机制提供一定的实验依据。 方法:该实验设计了四个实验组,分别是:空白对照组(Blank,B)、Mock组、阴性对照组(NC)、ARID1A干扰组。本实验根据实验目的,合成了4组ARID1A siRNA干扰序列,然后通过脂质体将这四组干扰序列转染到胃癌的MGC-803细胞中。待干扰序列靶向沉默ARID1A基因,转染48小时以后,通过realtime PCR及Western blot方法分别检测MMP1基因、Cyclin D1基因及C-jun基因在转录水平和翻译水平的表达。 结果:成功将siRNA干扰序列转染到人胃癌MGC-803细胞中,经干扰效果检测,siRNA-ARID1A靶向沉默ARID1A基因表达。在转染48h后,进行realtime PCR和Western blotting检测MMP1、Cyclin D1、C-jun基因表达水平。结果显示,沉默ARID1A后MMP1、C-jun基因在转录和翻译水平表达量相比对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05),而沉默ARID1A后Cyclin D1基因在转录和翻译水平表达量相比对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:在人胃癌MGC-803细胞中,MMP1、c-Jun、CyclinD1是ARID1A调控的下游靶基因,沉默ARID1A基因表达,上调了MMP1、c-Jun基因表达,相应的蛋白含量增加;下调了CyclinD1基因表达,相应蛋白质含量降低。