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花楸(Sorbus pohuashanesis Hedl)是北方未被充分开发利用的优良的绿化树种。我们以幼胚、成熟胚、无菌茎丛的茎段、成年树的嫩叶和茎段等为外植体,首次通过不定芽和腋芽增殖途径建立了两套高效、可靠的组培再生系统。 1、以花楸幼胚为外植体的研究表明: (1)取材时期和激素浓度配比是影响花楸幼胚丛生芽诱导效果的主要因素。最适采种时期为7月下旬至8月上旬,筛选出最佳的丛生芽诱导培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖15~20g/L+琼脂6g/L,丛生芽诱导率最高可达22.22%; (2)丛生芽最佳的增殖培养基为WPM+BA0.3~0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L,经继代培养一个幼胚可诱导出7~20个小茎丛;带有矮小不定芽的组织块可继代培养多次; (3)实验从改变培养基种类、降低激素浓度、增加琼脂浓度等方面采取有效的措施消除了茎丛增殖过程中的玻璃化现象; (4)当茎丛高达2~3cm时,转入生根培养基诱导生根,筛选出最佳的生根培养基为1/2MS+NAA0.3mg/L或IBA0.2mg/L; (5)移栽前将根系发达的生根苗打开瓶盖驯化3-5天,移入装有珍珠岩的塑料钵中炼苗一周,然后移栽到泥炭土和河沙以2:1混合的基质中,保持25±1℃,湿度>80%,成活率可达80%以上。 2、以无菌茎丛的茎段为外植体,筛选出最佳的腋芽增殖培养基为:WPM+IBA(或NAA)0.05mg/L+BA1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L,腋芽最大增殖倍数可达6。 3、以花楸成熟胚为外植体,在添加BA、TDZ、IBA、2,4-D、NAA组成的不同激素组合的MS培养基上培养。结果表明: (1)相同条件下,沙藏处理3个月的种子愈伤组织诱导率(100%)明显高于未经处理的种子(55.56%); (2)诱导愈伤组织的最佳激素组合和浓度为NAA0.5-1.0mg/L+BA1.0mg/L; (3)当NAA或2,4-D浓度≤0.1mg/L与BA组合能诱导出不定芽,经过继代可产生5~20个不定芽,经生根培养可成苗。 4、以成年树嫩叶和茎段为外植体,在添加BA、TDZ、IBA、NAA、2,4-D组成的不同激素组合的MS培养基上培养,以诱导愈伤组织的结果表明: (1)以幼嫩的茎段为外植体时,从愈伤组织的诱导率、体积和生长状态综合考虑,得出生长素的效应大小为NAA>2,4一D>IBA,最佳激素种类组合为NAAI.omg/L+BAO.5一3.omg/L、2,4一Dl.omg/L+BAO.5一3.omg/L或TDZO.01~0.5mg/L; (2)以幼嫩的叶片为外植体时,虽然诱导率可达100%,但只是在切口处长小米粒大小的愈伤组织,生长素的诱导效应大小为2,4一D>NAA>1 BA,最佳激素组合为2,4一D 1 .omg/L+BAO.5~3.omg/L: (3)无论以嫩叶还是茎段为外植体,将经初代培养诱导的愈伤组织转入增殖培养基,增殖效果都非常好,4周后愈伤组织长满培养瓶。