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研究背景与目的:功能内稳态(function-specifichomeostasis,FSH)是维持功能充分稳定发挥的负反馈机制。生物系统处于FSH就是其功能处于相应的FSH,其功能可以充分发挥。生物系统远离FSH就是其功能远离相应的FSH,就会出现功能失调或功能障碍。本文以PC12细胞为研究对象,选取温度、葡萄糖、谷氨酰胺和核苷酸四种参数,调节培养PC12细胞的不同营养状态,研究它们所维持的PC12细胞的增殖内稳态模型及它们对细胞内的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶及其还原酶的比值(NAD+/NADH)水平和第三类组蛋白去乙酰化酶(SIRT1)蛋白表达水平的影响。 研究材料和方法:1、在RPMI-1640培养液中,PC12细胞分别用温度梯度30、35、37、40℃,糖浓度梯度0、15、20、22、24、26、28、30、50、70、72、74、76、80、90mM,谷氨酰胺浓度梯度0、1、2、4、10mM,核苷酸浓度梯度0、10、20、25、30、40、50、500nM分组培养处理。12h后酶循环法检测NAD+/NADH比值和Westernblotting检测SIRT1蛋白表达水平;48h后MTT比色法检测细胞增殖活性。2、用糖浓度为30mM的RPMI-1640培养液培养PC12细胞,两天后分组更换10、30、90mM糖浓度培养液继续培养,0、2、8、72h后收样Westernblotting检测SIRT1蛋白表达水平。 结果:1、PC12细胞分别在温度37℃、糖浓度26~72mM、谷氨酰胺浓度1~2mM、核苷酸浓度30~40mM条件培养下,细胞增殖活性最高;30℃低温或40℃高温、低糖(<20mM)或高糖(>70mM)、高/低谷氨酰胺和核苷酸浓度条件培养下,细胞增殖活性显著降低。2、PC12细胞分别在温度35~37℃,糖浓度30mM、谷氨酰胺浓度2mM、核苷酸浓度30mM条件培养下,细胞的NAD+/NADH比值和SIRT1蛋白表达水平最低;30℃低温或40℃高温、低糖(<20mM)或高糖(>70mM)、过高/过低谷氨酰胺和核苷酸浓度条件培养下,NAD+/NADH比值和SIRT1蛋白表达水平显著升高。3、三种不同糖浓度处理2h后SIRT1蛋白表达水平均无明显变化:30mM处理组SIRT1蛋白表达水平在8h显著下降,72h后恢复对照组(0h)水平;10mM组SIRT1蛋白表达水平先升高(8h)后降低(72h),而90mM组在8h略有升高,72h无明显变化,但两组在72h时均低于对照组。 结论:在RPMI-1640培养液中,维持37℃、26~70mM糖、1~2mM谷氨酰胺、30~40nM核苷酸的条件使得细胞处于一个稳定的PISH。在阈值范围内的温度、糖、谷氨酰胺或核苷酸的变化,对细胞增殖没有显著影响,同时NAD+/NADH的比值和SIRT1蛋白表达水平最低。超过阈值的变化则引起增殖速度下降,且NAD+/NADH的比值和SIRT1蛋白表达水平显著升高。30mM糖处理处于PISH细胞72h后产生成功应激,SIRT1的表达上升到对照组水平;超过阈值的慢性应激(10、90mM糖)则引起增殖速度下降,且SIRT1蛋白表达水平因慢性应激先升高,后下降,但由于所维持的细胞增殖功能水平低而低于处于PISH的细胞。