胃癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率列居我国第二位。早在90年代Correa提出了经典的肠型胃癌演变模式，胃癌可以由胃癌前状态如萎缩性胃炎、肠上皮化生及不典型增生（上皮内瘤样变）演变而来，也有研究发现胃癌可能直接起源于骨髓的干细胞。而长期的炎症刺激下微环境的改变可以促进甚至导致胃癌的发生。据此我们提出了新的胃癌形成假说——“胃粘膜长期的炎症导致胃粘膜深层定向干细胞的破坏，炎症因子趋使下骨髓干细胞在损伤部位定植，增殖修复，而胃粘膜的炎症免疫反应的持续存在致使局部生物微环境改变，导致损伤区的腺体发生化生性修复，在这种持续的局部生物微环境作用下，抑癌基因失活，癌基因活化并产生相关因子和功能蛋白，这些因素作用下腺体细胞发生异型增殖、组织浸润导致癌的发生”。因此，明确从慢性胃炎到胃癌发生发展的关键调控因素，并对胃癌前病变阶段进行干预阻断成为胃癌防治和研究的重要方向。已有研究发现胃粘膜炎症损害后的修复再生过程涉及表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)等多种生长因子的共同参与，而这些重要因子的过量表达又与胃癌细胞的增殖、分化和转移密切相关。除了这些确定的因子，导致癌变发生还有新的生长因子吗？其作用机制又是什么？相关研究已成为胃癌的热点和难点。　　 再生蛋白Ⅰ（Regenara TiO2 gene I，RegI）是Terazono等首先从再生的鼠胰岛中检测并分离出来的能够促胰腺细胞再生的生长因子。人类RegIα是由166个氨基酸组成的含信号肽的蛋白质。其后研究发现在胃粘膜中也存在Reg蛋白的表达，其中RegIα是胃粘膜中最主要的Reg家族成员，在胃粘膜的修复中起到重要的作用。已经发现幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H.pylori）感染的患者和蒙古沙鼠胃粘膜中RegIα的表达水平升高；也有报道发现一些胃癌组织中存在RegIα的表达；而RegI转基因小鼠的胃底粘膜腺体明显增厚，促进胃腺体粘液颈细胞(Mucosa NeckCell，MNC)的增殖和分化，提示其可能是胃腺体干细胞样细胞所在区域的重要调节因素，可能与胃炎癌变有关。因此系统地对慢性胃炎、胃癌前病变、胃癌中的RegIα作研究意义极大。　　 1.材料方法：　　 1.1不同病理状态的胃粘膜组织和胃癌细胞Reglα的表达检测　　 收集胃粘膜活动性炎症、肠化、不典型增生及大致正常胃镜活检标本，并选取医院组织库收集的行胃癌切除手术的胃癌组织标本。用SYBR-Green荧光半定量PCR的方法检测不同病理状态下胃粘膜组织RegIα mRNA的表达情况，同时检测6株不同分化程度的胃癌细胞RegIα的mRNA表达。　　 1.2建立RegIα cDNA高表达的胃癌细胞株，观察癌细胞的增殖和凋亡　　 构建高表达RegIα cDNA的真核表达质粒pIRES2-RegIα-EGFP质粒，并以空质粒pIRES2-EGFP为对照，分别转染至MKN28细胞株，并用G418筛选稳定转染细胞。MTT法分别测定稳定转染的细胞在O、24、48、72、96小时的细胞活力。在稳定转染后的MKN28细胞中分别加入含0、100、200、800μmol/L的H2O2培养液，培养2小时、6小时后检测细胞活力；流式细胞测定200μmol/L的H2O2处理6小时后细胞的凋亡情况及western blot检测Bad、Bcl-xL和Caspase3的表达。　　 1.3建立慢性活动性胃炎大鼠模型，观察胃泌素与胃粘膜RegIα的变化　　 雄性Wister大鼠20只，分为对照组和模型组，模型组以2％水杨酸钠和30％酒精的混合液、20mmol/L的去氧胆酸钠2ml灌胃，0.1％氨水自由饮用，结合饥饿饱餐因素，共10周成模。对照组给予生理盐水2ml灌胃。成模后以4％的水合氯醛lml/100g腹腔注射麻醉，留取股动脉血3ml，留取血清及大鼠胃粘膜组织，H&E鉴定病理，免疫组化检测腺体增殖区PCNA和GSⅡ表达。ELISA方法检测大鼠血清胃泌素的水平，以SYBR-Green荧光半定量PCR的方法分别检测胃粘膜RegI、RegR的mRNA，Western blot的方法检测RegI蛋白的表达水平。　　 1.4 RegIα调控相关机制研究　　 以O、10-8、10-7、10-6mmol/L的Gastrinl7(G17)刺激AGS细胞并用MTS法测定细胞活力。分别测定10-7mmol/L的G17刺激后细胞Reglα的mRNA表达。将AGS细胞种分别予0、10-7、10-6mmol/L的G17刺激24、72h，分别提取细胞的总蛋白、细胞浆蛋白和细胞核蛋白，Western blot检测总蛋白、细胞浆蛋白和细胞核蛋白的β-catenin的表达。　　 2.主要结果：　　 2.1与大致正常组(n=25)相比，活动性炎症(n=20)、肠化(n=40)、不典型增生(n=17)中RegIα表达升高非常明显(0.62±0.45/2.68±0.60/2.11±0.42/2.61±0.71；P<0.01，P<0.05)；胃癌组RegIα表达也升高明显（2.47±0.53，P<0.01），而且Ⅲ/Ⅳ期的胃癌比Ⅰ期/Ⅱ期的RegIα表达更高(3.06±0.24/2.98±0.36/1.04±0.24，P<0.01)；在6株胃癌细胞中，分化程度低的MKN45和AGS细胞的RegIαmRNA表达水平增高较其他分化高的细胞株更明显，MKN45/AGS/MKN28/NCI-N87/BGC-823/SGC-7901细胞株的相对表达水平分别为3.24/3.77/-12.61/-3.70/-11.86/-5.39。　　 2.2成功构建了pIRES2-RegIα-EGFP质粒，继而建立了高表达RegIα cDNA的细胞株。高表达RegIα的MKN28细胞增殖活力较空白对照组明显增高（OD值：0.60±0.061/0.51±0.012,P<0.05;0.79±0.041/0.67±0.034,P<0.01），而给予H2O2诱导后，高表达RegIα的MKN28的细胞抗凋亡能力明显增强（OD值：1.73±0.067/1.44±0.131，P<0.01)。经western blot检测，RegIα高表达的MKN28细胞Bad、Caspase3蛋白明显降低，而Bel-xL表达水平升高。　　 2.3大鼠模型在建模第10周末处死，经病理鉴定，均成功建立慢性炎症的大鼠模型。模型组大鼠与对照组相比炎症评分明显升高（P<0.05），而腺体数目明显减少（38.8±4.59/44.2±2.57mm?1，P<0.05），但腺体厚度虽有所减少但并无明显差异（98.5±24.3/109.1±21.0μm，P>0.05）。模型组大鼠的血清胃泌素较对照组明显升高（375.0±103.9/209.6±48.2ng/ml，P<0.01）。免疫组化显示腺体增殖区模型组大鼠PCNA和GSⅡ表达增加。模型组大鼠胃粘膜RegI蛋白表达明显升高(0.96±0.12/0.56±0.13，P<0.05)，RegI受体的表达也明显升高（0.34±0.31/-0.31±0.22，P<0.05）。　　 2.4随G-17刺激浓度增加，AGS细胞增殖加快，且AGS表达RegIα mRNA的水平也随G-17刺激时间升高，Q-PCR结果显示当用10-7mol/L G17刺激96小时后，RegIα mRNA水平升高了4.18倍。随G-17刺激时间和刺激浓度增加，细胞浆的β-catenin表达逐渐下降，而细胞核内的β-catenin升高。　　 3.结论：　　 3.1在慢性活动性胃炎、胃癌前病变及胃癌中存在RegIα的高表达，RegIα高表达是胃粘膜受到病理损害后现象，可能是参与胃粘膜的修复的需要，事实上也可能参与了胃癌前病变胃癌变的过程，RegIα可能是胃癌发病调控过程中新发现的一种生长因子类物质。　　 3.2 RegIα表达水平与胃癌分期和癌细胞的分化程度有关，并可能通过Bad/Bcl-xl/Caspase3途径抑制癌细胞凋亡、促进癌细胞增殖，推断针对抑制RegIα的生物作用有望成为胃癌分子治疗的药物靶。　　 3.3胃泌素对胃粘膜RegIα的表达具有重要促进作用，胃泌素调节RegIα的表达可能是通过β-catenin的核转移途径而实现的。