原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，由于发病隐匿、恶性程度高、发 展迅速，因此治疗困难。目前肝癌治疗中，外科手术切除仍是首选方案，但疗效 并不理想。基因治疗是近年来兴起的一种新的治疗热点，被认为是治疗恶性肿瘤 最有希望的治疗方案之一。Fit3L是新近发现的早期造血生长因子，具有刺激机 体造血和增强机体免疫功能的双重作用。本研究课题以逆转录病毒载体介导，将 目的基因Fit3L导入小鼠肝癌细胞系Hepal-6，研究其生物学行为的变化，为临 床上开展肝癌的基因治疗提供必要的基础理论资料。 本研究 1、应用基因表达的逆转录病毒载体pBabe Puro构建一个携带小鼠 Flt3L的逆转录病毒载体pBabe/FlteL。将其转染单嗜性逆转录病毒包装细胞株 ψ-cre，其病毒上清转染双嗜性逆转录病毒细胞株ψ-crip，经嘌呤霉素筛选4 周，单克隆化，用 NIH3T3检测，其最高病毒滴度为 2．0 X 10⁶CFU／ml，命名为ψ一crip／Flt3L。2、上清感染法将目的某因导入小鼠肝癌 Hepal-6细胞系．经嘌 呤霉素选择培养得到携带目的基因的细胞克隆，命名为Hepl-6/Flt3L。RT-PCR 证实目的基因mRNA在靶细胞中能有效转录；免疫组化证实其表达Fit3L蛋白； ELISA检测其上清Flt3L 蛋白的分泌量为11．5ng／10⁶／48小时。3、动物实验结 果表明，虽然导入Flt3L基因后，并不影响Hepal-6肝癌细胞体外生长，但却能 使其体内成瘤性明显降低，提高了肿瘤细胞的免疫原性；将其作为瘤苗接种于小 鼠皮下，能激发特异性免疫保护反应，保护 100％（6/6）的小鼠免于对侧 Hepal-6 的再次攻击，而对照组为0%（0/6）;在微小肿瘤治疗方面，于接种Hepal-6/Flt3L 或 Hepal-6／pBabe前 5天，于小鼠对侧皮下接种野生型 Hepal-6细胞，4周后 Hepal-6／Flt3L可使对侧 80％的肿瘤消退（8／10），而 Hepal-6／pBabe则不能使对侧肿瘤消退；肿瘤组织冻切片免疫组织化学显示Flt3L引起肿瘤局部炎细胞的显 著浸润，CD₄⁺、CD₈⁺细胞明显多于对照组。