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黄颡鱼是一种在我国广泛分布的小型经济鱼类,目前为止,其种间区分仍然存在一些争论。本实验选取了在长江中分布的三个主要种(普通黄颡鱼,光泽黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼),结合形态学特征在分子水平进行种质鉴定。 首先选用20个随机引物研究三种黄颡鱼的RAPD图谱,三个种在引物S7下有各自特异标志性条带,将其作为RAPD标记;并由其设计了相应的序列特异扩增区域标记即SCAR引物,扩增检测后证明能对三种黄颡鱼实现有效鉴别。将得到的RAPD标记与SCAR标记相结合,能对三个黄颡鱼种进行准确可靠的鉴定。 vasa基因是多数被研究动物中共有的原始生殖细胞发生相关基因,一般认为Vasa蛋白在体内具有ATP依赖的RNA解旋酶活性,vasa mRNA或者Vasa蛋白特异性定位于生殖细胞系,为生殖细胞形成所必需,但是其具体作用原理和体外的功能尚未阐述清楚。 本实验从斑马鱼的卵巢中克隆出的vasa基因开放阅读框的cDNA序列,并从中扩增出斑马鱼DEAD box结构域序列,将全长序列和DEAD box结构域序列克隆至真核表达载体pcDNA-EGFP和pIRES-EGFP中,分别获得重组质粒。经PCR、双酶切及序列分析鉴定目的基因的插入位置、方向、编码框完全正确后将重组质粒转染至草鱼肾细胞(CIK)中,通过荧光来初步检测目的基因在CIK细胞中的表达,并通过显微注射的方法转至斑马鱼受精卵中,就外源基因产物对胚胎发育的影响进行初步探讨。