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目的:支气管肺发育不良(BPD)是早产儿中最常见的一种慢性肺部疾病。重症BPD 患儿的死亡率可达30%-40%,存活者常有慢性肺功能与气体交换异常,严重影响患儿生长发育及生活质量。BPD 的发病机制至今尚未完全明了,目前认为早产和高氧是造成BPD 的两个重要因素。传统BPD 的病理表现为肺不张与肺充气过度交替存在,严重的气管上皮损伤、明显的血管高压性损伤,肺泡数量减少,气管平滑肌增生,纤维过度增生等。近年来,由于产前糖皮质激素和生后表面活性物质的应用、辅助通气技术的改进以及早产儿的营养支持,BPD 的病理特点发生了新的变化。“新型BPD”以肺泡和肺毛细血管发育成熟障碍为特征。以往认为肺气道发育可决定肺血管发育方向,但是越来越多的证据表明肺血管并非仅沿气道被动伸展发育,肺血管的形成和成熟对肺泡发育及生后肺泡结构的维持都有重要的作用,肺血管发育成熟受阻可能在BPD 发病机制中占据重要位置。Sonichedgehog(Shh)信号通路是调节胚胎发育的基本信号通路之一。有研究表明Shh信号通路在促进血管生成方面也发挥着重要的作用。目前认为Shh 信号通路可通过直接作用于内皮祖细胞(EPC),促进其增殖、迁移、分化形成血管腔,以及上调一些促血管生成因子的表达这两条途径来促进血管生成。血管生成素-1(Ang-1)是Shh 信号通路的下游因子之一。Ang-1是内皮细胞特异性的促血管生成因子,主要由血管内皮旁细胞分泌,在血管生成后期的血管的重建及内皮细胞和支持细胞的相互作用中发挥调节作用。本研究采用经典的85%高氧持续吸入肺损伤模型,观察新生大鼠高氧暴露后,肺血管发育情况及肺组织中Shh 信号通路及Ang-1表达的变化,旨在探讨新生大鼠高氧暴露导致的肺损伤中肺血管发育受阻的机制及Shh 信号通路可能发挥的作用。
方法:新生SD 大鼠随机分为高氧组和空气组,高氧组生后6h 内开始持续吸入85%氧气。生后3、7、14天每组各随机取8只,肺组织切片行HE 染色,进行肺组织形态学分析及辐射状肺泡计数(RAC);通过肺动脉钡剂造影及肺动脉密度检测来评价肺血管的发育;采用免疫组化技术检测两组大鼠肺组织内CD31含量的表达;研究高氧暴露对新生大鼠肺组织Shh 通路中Shh、Ptch-1、Ang-1因子等表达的影响,采用RT-PCR 和Western blot 技术检测肺组织Shh 通路和Ang-1的mRNA和蛋白水平。
结果:⑴新生大鼠高氧暴露14天后,肺组织的病理表现与早产儿支气管肺发育不良(BPD)的病理表现相似。⑵高氧组RAC 值在7d 和14d 时均显著低于空气组(10.55±0.13和11.74±0.19,12.47±0.05和15.03±0.16,P<0.05)。⑶肺动脉钡剂造影显示,高氧暴露14天后,大鼠肺动脉主干直径小,肺小动脉显影明显减少。高氧组肺动脉密度在14d 时显著低于空气组(3.55±0.09和6.03±0.16,P<0.05)。⑷高氧暴露7d 和14d,高氧组肺组织Shh、Ang-1mRNA 和蛋白水平均显著低于空气组(P<0.05)。Ptch-1mRNA 和蛋白水平两组之间差异无统计学意义。
结论:新生大鼠高氧暴露后肺血管发育受阻,高氧暴露可通过抑制肺组织Shh 信号通路来下调Ang-1的表达,从而导致肺血管发育障碍。Shh信号通路在早产儿BPD 的发生机制中可能占有重要作用。