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铁皮石斛是我国传统名贵中药之一,被收载入《中国药典》2005年版,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功能,具有很高的药用价值和经济价值。铁皮石斛的种子非常细小,自然条件下很难萌发生长。由于近年来的过度采挖、自然生境的破坏,其野生资源日益匮竭。本文拟通过现代生物技术的手段实现铁皮石斛的工厂化快繁,从而取代和保护铁皮石斛的野生资源。本研究以茎节为材料建立无菌系,筛选适于铁皮石斛增殖和生根的培养条件。结果表明,利用次氯酸钠消毒8min,后,外植体的成活率可达到85%,无菌率达到90%。MS培养基最适于铁皮石斛的生长,60天达到较大的增殖倍数。以NAA0.4 mg·L-1、6-BA5mg·L-1为继代培养基时铁皮石斛植株健壮,增殖倍数高达到3.2倍。NAA0.3 mg·L-1、6-BA2 mg·L-1时,最适于铁皮石斛生根,生根率达到96.67%。本试验研究了天然添加物对铁皮石斛生长的影响。结果表明,香蕉汁能促进植株生长,根粗壮,整齐,叶色浓绿,茎粗节短;能显著促进铁皮石斛的芽增殖,可达到4.98倍。还能够促进生物碱和多糖的积累,分别达到2.8mg·g-1和19.2%。当添加20%的土豆汁时,铁皮石斛的增重倍数达到3.51倍。这种作用可能与天然添加物中的植物激素和可溶性糖有关,土豆中含有较丰富的生长素和细胞分裂素,分别达到1.07μg·g-1和0.89μg·g-1,而香蕉中脱落酸的含量最高为4.61μg·g-1,土豆和香蕉中均含有丰富的可溶性糖。本试验研究了菌根菌对铁皮石斛生长的影响。从春石斛和蝴蝶兰中分离出11株菌根菌,经液体发酵后,分别提取菌丝提取物,发酵液和发酵液菌丝混合物,结果表明菌株ph5最有利于铁皮石斛增重和干物质的积累,发酵液菌丝混合提取液对铁皮石斛的促进作用最强。同时能够促进铁皮石斛体内生长素、细胞分裂素的合成,脱落酸含量也显著高于正常对照组。本研究证明了铁皮石斛试管苗同野生铁皮石斛一样具有显著的抗肿瘤活性。小鼠实验表明,铁皮石斛能够显著延长S180铁皮石斛试管苗腹水小鼠的生存期,抑制肿瘤生长,增加免疫器官比重,提高外周血白细胞数目。体外抗肿瘤实验表明,铁皮石斛含药血清能够明显抑制SGC7901细胞增殖,促进SGC7901细胞凋亡。铁皮石斛的抗肿瘤作用可能与抑制bcl-2基因表达和促进p53基因表达有关。