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国际兽疫局(OIE)规定的A类传染病中,包括两种禽类烈性传染病,分别为高致病性禽流感(HPAI)和新城疫(ND)。疫苗接种是预防这两种疫病最有效的措施,但弱毒苗和灭活苗的免疫接种会干扰现有技术条件下的免疫监测和流行病学调查,给ND和AI的诊断和清群增加难度;基因工程亚单位苗虽然表现出良好的免疫效果,然而生产成本高,免疫期短,不可能成为预防疫病的理想疫苗。对于核酸疫苗的研究也才刚刚起步,尚有许多问题有待解决。近年来,随着重组DNA技术和反向遗传学技术的发展,使开发可克服传统疫苗缺陷的基因工程疫苗成为可能。目前对新城疫病毒(NDV)活载体疫苗的研究较为深入,这种基因工程疫苗的保护效率高,又不干扰临床检测和检疫,是极有发展前途的一类的基因工程疫苗。本研究对现地分离的四株H9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因进行序列测定,选取其中一株,在NDV LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达H9亚型AIV野生型HA基因的重组NDV基因组cDNA克隆,经间接免疫荧光、RT-PCR鉴定及序列测定和Western-blot鉴定,成功拯救重组病毒rL-H9HA。重组病毒MDT≥168h,ICPI和IVPI均为0。重组病毒保持了LaSota弱毒疫苗亲本毒株对鸡胚良好的高滴度生长适应和低致病特性,并且鸡胚连续传9代次仍保持HA的稳定表达及生物学特性不变。以1×106EID50病毒量接种SPF雏鸡,免疫后21d对F48E9的致死性攻击可提供100%的保护;对于H9亚型AIV 002的攻击,免疫鸡在攻毒后3d的喉头和泻殖腔拭子病毒分离阳性率为1/10,5d时喉头一例阳性,其余均为阴性。而对于H9亚型AIV FJ株的攻击,仅3d的喉头拭子一例阳性,其余为阴性。免疫组病毒的分离率显著低于对照组。重组病毒rL-H9HA具有作为同时预防H9亚型AI和ND的双价苗的应用前景。