反复熔铸对非镍基烤瓷合金细胞毒性的影响及其机制的研究

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目的:研究反复熔铸对钴铬、纯钛、钯基和金铂等4种非镍基烤瓷合金离子析出、体外细胞毒性、细胞周期及细胞凋亡等生物相容性相关指标的影响。方法:(1)将从厂家购买的上述4种烤瓷合金分别经过1~3次熔铸,即获得分别经1~3次熔铸后的4种烤瓷合金的片状测试试件。每次熔铸后的烤瓷合金在再次熔铸前均需经过“非镍基烤瓷合金再次熔铸前处理工艺”进行严格处理,形成再次熔铸的原料。参照ISO10993-5:2009标准要求,分别将上述4种烤瓷合金的片状测试试件使用DMEM细胞培养液进行浸提;(2)使用电感耦合等离子体原子发射光谱仪(ICP-AES)及分析软件分别检测上述4种烤瓷合金测试试件浸提液中金属离子的种类和水平;(3)分别使用上述4种烤瓷合金测试试件的浸提液培养小鼠肺结缔组织成纤维细胞(L-929),采用CCK-8法进行体外细胞毒性试验检测浸提液对L-929细胞增殖的抑制情况,倒置相差显微镜观察L-929细胞的生长情况;(4)分别使用上述4种烤瓷合金测试试件的浸提液培养L-929细胞,碘化丙啶(PI)进行细胞染色,通过流式细胞仪检测各个实验组细胞周期的改变;(5)分别使用上述4种烤瓷合金测试试件的浸提液培养L-929细胞,Annexin-V-FITC/PI进行细胞荧光双染,倒置荧光显微镜观察,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:(1)经过1~3次熔铸后除第3代钴铬烤瓷合金与第1、2代相比除镓(Ga)的析出量增高外(P<0.05),各代钴铬烤瓷合金之间其他金属离子的析出量及金属离子析出的总量均无显著变化(P>0.05);经过1~3次熔铸后各代纯钛烤瓷合金之间金属离子析出的种类和水平均无显著变化(P>0.05);经过1~3次熔铸后第3代钯基烤瓷合金镓(Ga)的析出量较第1代与第2代增高(P<0.05),第3代钯基烤瓷合金锌(Zn)的析出量较第1代与第2代降低(P<0.05),各代钯基烤瓷合金之间其他金属离子的析出量及金属离子析出的总量均无显著变化(P>0.05);经过1~3次熔铸后第2、3代金铂烤瓷合金中均检出第1代未检出的银(Ag)与钯(Pd)离子,第2、3代金铂烤瓷合金金属离子析出的总量也较第1代增加(P<0.05)。(2)经1~3次熔铸后钴铬烤瓷合金的细胞毒性级为1~2级,显示轻微毒性,结合细胞形态分析,认为其生物相容性合格;经1~3次熔铸后纯钛与钯基烤瓷合金的细胞毒性级均为1级,显示轻微毒性,可认为其有较好的生物相容性;经1~3次熔铸后金铂烤瓷合金的细胞毒性级为0~1级,显示为无细胞毒性或者为轻微毒性,其有良好的生物相容性。(3)经1~3次熔铸后钴铬烤瓷合金对L-929细胞细胞周期的影响无显著差异,但与阴性对照比较钴铬烤瓷合金具有抑制细胞DNA合成、细胞分裂增殖的作用;经1~3次熔铸后纯钛、钯基与金铂烤瓷合金均对L-929细胞细胞周期的影响较小,且各代烤瓷合金之间无显著差异(P>0.05)。(4)经1~3次熔铸后钴铬与纯钛烤瓷合金会诱导L-929细胞凋亡,细胞凋亡为细胞死亡的主要模式,但各代之间早期凋亡率、晚期凋亡与坏死率差别均无统计学意义(P>0.05);经1~3次熔铸后钯基烤瓷合金未显著诱导细胞凋亡,各代之间早期凋亡率、晚期凋亡与坏死率差别均无统计学意义(P>0.05);经1~3次熔铸后金铂烤瓷合金均未诱导细胞凋亡。结论:通过浸泡实验、体外细胞毒性实验、细胞周期与细胞凋亡检测等实验,研究认为在使用“非镍基烤瓷合金再次熔铸前处理工艺”进行严格处理后,在真空加氩气保护条件下,经过1~3次熔铸的钴铬、纯钛、钯基和金铂等4种非镍基烤瓷合金的生物相容性未发生显著变化。
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