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本文主要围绕粮食中真菌毒素的计量技术,首先建立了玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)的HPLC-DAD-MS/MS方法。其次,首次研制了乙腈中ZEN国家一级标准物质。第三,建立了粮食基体中真菌毒素的高准确度HPLC-MS/MS分析方法。主要内容如下:1.基于HPLC-QTRAP-MS和HPLC-DAD方法,建立了 ZEN主成份和微量杂质的定性鉴定和定量测量的高准确度技术。通过上述两种方法,成功鉴定了 ZEN中的2种杂质,分别为玉米赤霉酮(ZAN)和7’-脱氢玉米赤霉烯酮(7’-DehydroZEN)。采用质量平衡法和定量核磁法对高纯ZEN进行准确定值。两种方法定值结果分别为997.5mg/g和993.5mg/g。ZEN定值结果最终由两种方法的平均值决定,为995.5mg/g。2.基于HPLC-DAD-MS/MS方法,研制了 ZEN纯度标准物质与溶液标准物质,并详细研究了 ZEN标准物质的稳定性。稳定性主要考虑光照,溶剂,温度,浓度等对ZEN的影响。实验结果表明ZEN乙腈溶液受紫外光照影响非常大,在254nm紫外灯下照射1天,主成分值降低了 52%,主要转化成其顺式异构体(cis-ZEN),继续监测紫外灯照射下ZEN稳定性,可以发现,在照射1天后,主成分与顺式ZEN都在持续下降,当照射27天后,主成分与顺式ZEN达到相对稳定状态,分别占原始浓度的14.4%和22.5%,而有大约60%的未知产物生成。然而ZEN纯物质在紫外灯照射下相对稳定。实验结果也表明ZEN乙腈溶液在可见光下相对稳定。采用棕色的分装瓶,可以消除大部分的光照。通过不同溶剂与温度的比较,可以ZEN看出在甲醇溶液中更不稳定;高温下ZEN乙腈溶液不稳定。实验结果表明浓度对ZEN乙腈溶液没有影响。通过对ZEN稳定性的详细研究,为标准物质的制备提供了有利依据,因此,ZEN溶液标准物质研制采用乙腈作为溶剂,棕色瓶分装,-20℃避光保存。通过标准物质的定值与不确定度评估,ZEN纯度标准物质与溶液标准物质的定值结果为99.5±0.2%,11.1μg/mL±2%。3.建立了粮食基体中8种真菌毒素的HPLC-MS/MS分析方法,包括黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,ZEN,赭曲霉毒素A,脱氧雪腐镰刀菌烯醇,伏马毒素B1。该方法首次采用添加样品和天然污染样品优化提取溶剂,结果表明,采用天然污染样品通过比较测量结果的方式优化提取方法更为科学和有效。实验还对不同的取样量及内标的不同添加方式进行了比较,结果表明取样量为10g,内标在前处理过程后添加能得到满意的结果。真菌毒素在粮食基体中均有很强的基质抑制现象,而且与其相应的同位素标记物的基质效应有较大差异,如果采用溶剂校准液进行定值,基质效应会直接影响测量结果的准确性。因此,在没有空白基质情况下,可以采用校正因子θ值对定量结果进行校正,以消除基质效应的影响。