菊花CmDREBa-2基因的同源转化及功能验证

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:marina12345
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菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)作为中国十大名花和花中四君子之一,广受喜爱。本研究以菊花品种‘早玉盘’无菌苗叶片为试验材料,在其高频再生体系的基础上,建立了稳定的遗传转化体系;利用农杆菌介导法将CmDREBa-2基因转入‘早玉盘’中,并对所获抗性植株进行了功能验证。本研究为了解CmDREBa-2基因的生物学功能奠定了一定的基础。主要试验结果如下:1.菊花品种‘早玉盘’无菌苗上部叶片的再生能力比中部和下部叶片强。2.菊花品种‘早玉盘’不定芽分化培养基为MS+0.6mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA;生根培养基为1/2MS+0.3mg·L-1NAA。卡那霉素筛选不定芽浓度为15mg·L-1;卡那霉素不定芽生根的筛选浓度为15mg·L-1;头孢霉素抑制农杆菌筛选浓度为200mg·L-1。遗传转化体系为:预培养2d,菌液浓度OD600=0.6,稀释倍数为50倍,侵染时间7min,共培养2d,延迟培养3d,该品种获得抗性植株8株,PCR检测获得阳性植株3株。3.对PCR检测呈阳性的转基因植株进行了抗旱和抗白色锈病能力检测验证。结果表明,在受到自然失水水分胁迫时,三个转基因型植株(CmDREBa-2-OX4、CmDREBa-2-OX5、CmDREBa-2-OX8)的相对水分亏缺值明显要小于野生型植株(WT),在水分胁迫6d时,WT的水分饱和亏缺系数约为CmDREBa-2-OX4的1.5倍、约为CmDREBa-2-OX5的2.2倍、约为CmDREBa-2-OX8的1.4倍,其中CmDREBa-2-OX5的抗水分胁迫能力最强;在失水4h时,WT的失水速率为CmDREBa-2-OX5的1.6倍;在失水5h时,WT的失水速率为Cm DREBa-2-OX5的1.45倍;野生型植株在水分胁迫2d、4d、6d时的萎蔫指数均高于CmDREBa-2-OX5株系,转基因株系与野生型植株相比表现出更强的耐水分胁迫能力。在白色锈病病原菌的胁迫下,CmDREBa-2-OX5株系中CmDREBa-2基因大量表达,在接菌后6h表达量达到峰值约为对照组的3倍。
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