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目的:探讨MiR-27a对血小板氧化应激刺激后自噬的影响及其机制方法:(1)通过培养双向分化潜能的白血病粒细胞MEG-01,采用佛波酯(PMA)诱导其向巨核细胞系分化,最终产生血小板并进行鉴定。(2)通过向分化产生的血小板内分别导入MiR-27a阻遏物及模拟物,设置5个组,正常对照组:PMA诱导MEG-01细胞后产生的血小板组;MiR-27a mimic组:MiR-27a模拟物导入PMA诱导MEG-01细胞后产生的血小板组;mimic NC组:将MiR-27a模拟物阴性对照导入PMA诱导MEG-01细胞后产生的血小板组;MiR-27a inhibitor组:MiR-27a抑制物导入PMA诱导MEG-01细胞后产生的血小板组;inhibitor-NC组:将MiR-27a抑制物阴性对照导入PMA诱导MEG-01细胞后产生的血小板组。(3)在5组血小板中加入双氧水使其终浓度为1mmol/L,刺激2h模拟血小板氧化应激状态(双氧水浓度时间由同一课题成员测定)。(4)用q-RT-PCR检测各组血小板中MiR-27a的表达水平;用q-RT-PCR检测各组血小板加入双氧水刺激后的PHB mRNA表达水平;用Western Blotting检测各组血小板加入双氧水刺激后的PHB、LC3、CD62P蛋白表达水平。结果:(1)PMA加入白血病粒细胞MEG-01细胞后,通过检测血小板表面标志物CD61,诱导后较诱导前流式检测的CD61上升[(73.90±1.96)vs(7.09±0.60)n=3,p<0.05],诱导后的CD61mRNA也上升[(7.73±0.33)vs(1.00±0)n=3,p<0.05];以及观察到MEG-01细胞向产板型巨核细胞发生形态学变化,由此证明我们成功诱导白血病粒细胞MEG-01细胞分化产生血小板;(2)转染后MiR-27a检测结果:MiR-27a mimic组与MiR-27a mimic阴性对照组相比,MiR-27a的表达显著升高[(52.21±1.87)vs(0.98±0.16)n=3,p<0.05];MiR-27a inhibitor组与MiR-27a inhibitor阴性对照组相比,MiR-27a表达下降[(0.054±0.022)vs(0.60±0.15)n=3,p<0.05];(3)在5个组中加入双氧水刺激诱导后的血小板,PCR检测各组PHBmRNA,RT-PCR检测结果:MiR-27a mimic与MiR-27a mimic阴性对照组相比PHBmRNA[(1.20±0.11)vs(1.10±0.018)n=3]、MiR-27a inhibitor组与MiR-27a inhibitor阴性对照组相比PHBmRNA[(1.11±0.08)vs(1.05±0.01)n=3]均无差异(P>0.05);WB检测结果:MiR-27a mimic与MiR-27a mimic阴性对照组相比PHB蛋白[(0.34±0.10)vs(1.08±0.01)n=3]、LC3II/I蛋白[(0.54±0.05)vs(0.88±0.06)n=3]、CD62P蛋白[(0.22±0.03)vs(0.54±0.05)n=3]表达均下降(P<0.05);MiR-27a inhibitor组与MiR-27a inhibitor阴性对照组相比PHB蛋白[(2.92±0.22)vs(1.045±0.02)n=3]、LC3II/I蛋白[(1.57±0.08)vs(1.02±0.05)n=3]、CD62P蛋白[(1.2±0.09)vs(0.53±0.01)n=3]表达均升高(P<0.05)。结论:(1)在氧化应激刺激下,MiR-27a可能通过降低PHB蛋白表达,抑制血小板自噬,从而抑制血小板的活化。