论文部分内容阅读
目的：细胞凋亡（APO）是按一定规律和程序进行的，许多因素均可诱导细胞凋亡。肿瘤的发生与细胞凋亡关系密切，因此，通过诱导肿瘤细胞凋亡来探索肿瘤治疗已成为目前研究的热点。本研究运用三氧化二砷（Arsenic Trioxide，As2O3）在体外诱导人肝癌细胞BEL-7402发生凋亡，并使用基因芯片（Gene chip，or DNA microarray）对凋亡细胞进行基因表达谱研究，旨在于分子水平了解As2O3诱导人肝癌细胞BEL-7402发生凋亡之机制，为今后临床上进一步运用As2O3治疗原发性肝癌（Primary hepatocarcinoma）奠定基础。 方法：取对数生长期人肝癌细胞BEL-7402，经As2O3处理后，用MTT、琼脂糖凝胶电泳、原位末端转移酶技术（TUNEL）、透射电镜及流式细胞仪等方法研究细胞凋亡。然后对发生凋亡的BEL-7402细胞进行基因芯片检测，了解凋亡时的基因表达谱。 结果：As2O3在体外对BEL-7402细胞生长具有显著抑制作用，随着作用时间的延长和As2O3剂量的增加，抑制作用随之增强。在本实验条件下，As2O3诱导50％以上BEL-7402细胞发生凋亡的浓度为2umol/L。经As2O3作用后的BEL-7402细胞，在琼脂糖电泳中出现了典型的DNA凋亡条带，用流式细胞仪检测出了典型的凋亡峰，电镜下观察到了典型的凋亡细胞形态学改变：如细胞核仁消失，染色质浓缩、碎裂，聚于核膜边缘并形成凋亡小体。在基因芯片检测中，共有69条基因发生了差异性表达，其中中南大学 博士学位论文有5条属于与凋亡相关的基因，它们 分别是：HIPZ，UBEZD3，APPf－l，BCL 10，TRAF－3，除HIPZ 为表达降低 外，其他均为表达增加基因。 结论：AS刃。在体外能显著抑制人肝癌细胞BEL广402生长，这种抑制作用是通过诱导BEL刁402细胞发生细胞凋亡而实现的。经AS刀。作用的BEL广402细胞能发生典型的细胞凋亡，在本实验条件下，AS刃。诱导50％以上既L－7402细胞发生凋亡的浓度为Zumol／L。BEL－7402细胞发生凋亡后，有5条与凋亡相关的基因发生了差异性表达，其中HIPZ表达降低，UBEZD3，Apaf－l，BCL10，TRAF－3表达增加。根据实验结果，作者认为，AS几作为凋亡信号，在诱导BEL刁402细胞发主凋亡时，启动了细胞凋亡的两条途径，即死亡受体途径与线粒体途径，由此致casp3活化而引发casp级联反应，最后导致细胞凋亡发生。在本试验中，作者率先对As从诱导凋亡肝癌细胞BEL刁402进行了基因芯片研究，填补了国内外在此研究上的空白，为今后进一步在分子水平上研究细胞凋亡和临床探索肝癌治疗新途径打下了良好的基础。