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蜂王浆是由蜜蜂工蜂咽下腺、上颚腺和脑后腺等腺体(王浆腺)分泌的乳状物质,是1~3日龄工蜂幼虫及蜂王的终生食料,它含有丰富的生物活性成分,具有多种生理活性和营养保健功能。近年来,蜂王浆蛋白,尤其是王浆主蛋白(MRJPs)逐渐成为新的研究热点。本文主要开展了蜂王浆的主要功能蛋白—MRJPs和抗菌肽royalisin的分离、生物活性检测及应用研究。主要结果如下:一、重组royalisin发酵与ELISA定量检测为充分利用重组抗菌肽royalisin,用royalisin多克隆抗体建立了royalisin的ELISA快速检测方法,并将该方法用于测定不同培养温度下royalisin的产量,获得最佳培养温度。结果表明:在27℃条件下,得率为3.01mg/L,大于实验室之前产率(1.5mg/L)。为进一步发酵生产提供了重要依据。将不同蜂种的血淋巴、蜂王浆冻干粉作为抗原,用建立的ELISA方法检测样品吸光度,代入所建回归方程,计算得到各样品中的royalisin的量。证实中华蜜蜂的抗病性(即royalisin含量)强(多)于意蜂。二、用MRJP1多克隆抗体ELISA快速检测蜂王浆新鲜度建立了以MRJP1多克隆抗体为一抗的ELISA快速检测蜂王浆新鲜度的方法。将鲜王浆放入40℃恒温箱,分别在0、7、14、21、28、35、42和49天取样用ELISA法检测MRJP1含量。结果证明,MRJP1在储存中明显降解。同时通过SDS-PAGE分析进行了验证。三、蜂王浆中MRJPs的超滤分离以MRJPs提取率为考核指标,分别考察pH、离子强度和水料比三个单因素对MRJPs提取率的影响;然后通过进行4因素3水平正交试验和统计,获得最佳工艺参数;最后进行最佳工艺验证,产物冻干粉MRJPs蛋白鉴定,测定副产物中总糖和王浆酸(10-HDA)的回收利用率。测得在最优条件,即:水料比5:1(mL/g),离子强度0.5(mol/L), pH7, MRJPs提取率为82.63%。且此时滤后液的总糖和10-HDA的回收利用率分别为3.66%和2.11%。