环介导的等温扩增反应检测CK-19基因在乳腺癌哨兵淋巴结的表达

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目的:建立一种更敏感、客观、快速的检测哨兵淋巴结转移的方法,以提高乳腺癌患者的生活质量。方法:①通过美蓝染色法获取乳腺癌患者的哨兵淋巴结,并采用传统的组织病理学方法检测其转移情况②将乳腺癌细胞系和淋巴瘤细胞系采用环介导的等温扩增反应检测CK-19基因的表达情况,观察其是否表达CK-19基因,证明该反应是否可以区分上皮来源和淋巴来源的细胞系。③将术中所取哨兵淋巴结均匀分成a、b、c、d四份,ac常规送病理检查,bd制成细胞匀浆,进行环介导的等温扩增反应,样品的RT-LAMP扩增之后的产物经凝胶电泳,观察其电泳条带,每一次检测设乳腺癌细胞系为阳性对照,淋巴瘤细胞系为阴性对照。并与病理结果进行对比。结果:①34例患者中成功获取哨兵淋巴结共80枚,其中病理检测结果为阳性的15例。②乳腺癌细胞系和淋巴瘤细胞系经环介导的等温扩增反应后,乳腺癌细胞系得到特征性阳性电泳条带,而淋巴瘤细胞系均为阴性,说明该反应可以很好的区分乳腺癌细胞和淋巴瘤细胞。③十个病理结果为阳性的哨兵淋巴结,经环介导的等温扩增技术扩增CK-19基因,均得到特征性电泳条带,与病理结果完全吻合,符合率100%。结论:通过本实验我们看出LAMP反应可以高效、快速、准确的对乳腺癌哨兵淋巴结进行检测。同时还可以检测整个淋巴结组织的转移情况,因而采用该方法进行哨兵淋巴结转移的检测具有非常良好的应用前景。
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