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背景:脂联素(Adiponectin,AD)是一种由白色脂肪组织(WAT)分泌、在血浆中含量最高的脂肪因子,在炎症、免疫调节、代谢等多种生理病理过程中发挥着重要作用。既往研究发现AD在类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)滑膜组织中高表达,CIA小鼠关节局部高表达AD后骨侵蚀明显加重。《Arthritis&Rheumatism》等多篇文献报道AD与RA患者骨侵蚀的影像学进展相关。但AD如何介导骨侵蚀,机制尚不清楚。传统认为滑膜炎是骨侵蚀的核心机制。而最新研究结果发现RA骨侵蚀与炎症的关系并不平行或者是分离的。TNF-α和IL-6等RA中的关键细胞因子可以通过特有的炎症反应直接作用于破骨细胞生成,加重骨髓破骨微环境。目前认为,RA骨侵蚀与骨髓水肿强相关。破骨细胞(Osteoclasts,OCs)是RA骨侵蚀最关键的细胞,由破骨前体细胞(Osteoclast Precursors,Pre-OCs)迁移至骨面融合分化形成。因此,迁移和骨髓外周血平衡是OCs介导骨侵蚀的关键步骤。但Pre-OCs如何迁移至骨表面,又是如何离开骨髓进入外周血的研究甚少,机制尚不十分清楚。既往AD与OCs的相关研究主要在AD能通过促进RASF迁移、侵袭和炎症因子分泌等间接途径影响OCs,介导骨侵蚀。而AD是否直接影响Pre-OCs迁移和骨髓外周血平衡,加重骨髓破骨微环境,介导骨侵蚀,尚不清楚。因此,本文致力于研究AD对Pre-OCs迁移和骨髓外周血平衡的影响,将着重阐明:1.AD是否直接影响Pre-OCs迁移;2.AD是否影响Pre-OCs骨髓外周血平衡,加重骨髓破骨微环境,从而介导RA骨侵蚀;整个研究分为以下2个部分:第一部分脂联素影响破骨前体细胞迁移的研究目的:探讨脂联素(AD)对破骨前体细胞(Pre-OCs)迁移的影响及机制方法:Transwell分析AD对Pre-OCs迁移的影响。Real-time PCR检测AD对Pre-OCs 表达 CXCR4、CX3CR1 的影响。结果:Transwell发现AD组与NC组相比,迁移至上层小室膜底部的Pre-OCs明显减少。Real-time PCR结果表明Pre-OCs加入AD24小时后CX3CR1表达减少,CXCR4表达没有明显变化。结论:脂联素通过抑制CX3CR1的表达直接抑制破骨前体细胞的迁移。第二部分脂联素影响破骨前体细胞骨髓外周血平衡的研究目的:探讨脂联素对破骨前体细胞骨髓外周血平衡的影响。方法:流式细胞仪检测RANKL动员骨髓Pre-OCs小鼠和CIA小鼠注射AD对骨髓和外周血中Pre-OCs%的影响。CIA小鼠骨关节组织TRAP染色检测破骨细胞生成。Transwell分析AD对S1P诱导RAW264.7迁移的影响。Real-time PCR检测AD对RAW264.7细胞表达S1P1和S1P2的影响。Real-time PCR检测CIA小鼠注射AD对BMC表达S1P1的影响。结果:流式结果表明在RANKL诱导的Pre-OCs动员模型中,AD组外周血和骨髓中Pre-OCs比例都明显降低,在CIA小鼠模型中,AD组外周血循环中破骨前体细胞的比例下降,骨髓中破骨前体细胞比例升高。CIA小鼠骨关节组织TRAP染色,AD组骨髓破骨细胞生成明显增多。Transwell发现AD+S1P组与SIP组相比,Pre-OCs迁移明显减少。Real-time PCR结果显示在RAW264.7,AD+S1P组与S1P组相比,S1P1表达减少,S1P2表达无明显变化。CIA小鼠模型中,AD组BMC表达S1P1下降。结论:AD通过抑制Pre-OCs表面S1P1的表达,抑制Pre-OCs从骨髓向外周血迁移,更多的Pre-OCs滞留于骨髓中,加重骨髓破骨微环境,介导骨侵蚀。