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目的： 1、合成和鉴定叶酸偶联壳聚糖（FA-CS），制备 FA-CS纳米粒并优化反应条件，观察293T细胞对纳米粒的吸收情况。 2、以FA-CS纳米粒为非病毒基因载体，研究其与超声（US）或US和声诺维微泡（MB）联合应用转染293T细胞的效率，并比较不同转染方式对293T细胞活性的影响。 方法： 1、采用还原酰胺化法合成FA-CS，通过傅里叶变换红外光谱仪（FTIR）鉴定合成的产物。2、采用复凝聚法制备 FA-CS纳米粒，通过正交实验优化反应条件，采用马尔文粒度仪和透射电子显微镜（TEM）分析纳米粒的粒径分布、表面电荷和形态；倒置荧光显微镜观察293T细胞对纳米粒的吸收情况。 3、以表达绿色荧光蛋白的质粒（pEGFP-C3）为报告基因，采用复凝聚法制备叶酸偶联壳聚糖载基因（FA-CS/P）纳米粒，通过马尔文粒度仪和TEM观察评估纳米粒的粒径分布、表面电荷和形态，琼脂糖凝胶电泳实验分析FA-CS与质粒的结合情况，紫外微量分光光度计检测包载率。 4、体外转染实验分为8组：空白对照组（C）、单独质粒组（P）、壳聚糖载基因纳米粒组（CS/P）、FA-CS/P纳米粒组（FA-CS/P）、超声+声诺维微泡+质粒组（US+MB/P）、超声+FA-CS/P纳米粒组（US+FA-CS/P）、超声+声诺维微泡+FA-CS/P纳米粒组（US+MB+FA-CS/P）、脂质2000转染组（L），通过荧光显微镜、流式细胞仪分析细胞的基因转染效率；应用CCK-8法测定不同处理方式对293T细胞活力的影响。 结果： 1、FTIR显示叶酸和壳聚糖的反应产物形成酰胺键，表明叶酸成功与壳聚糖偶联； 2、经正交实验优化，在FA-CS浓度为0.1 mg/ml、硫酸钠浓度为50 nmol/L、反应温度为55℃时可制备形态较为规则的纳米粒，其粒径为250.6 nm、Zeta电位为40.5 mV，PDI为0.268； 3、倒置荧光显微镜观察到293T细胞可有效吸收FA-CS纳米粒。 4、在FA-CS与质粒的质量比为3时，通过复凝聚法可制备粒径为355.1 nm、Zeta电位为10.4 mV的FA-CS纳米粒，其包载率为（90.8±1.8）％，TEM观察纳米粒的形态欠规则，但未见明显团聚现象，琼脂糖凝胶电泳实验观察到FA-CS可将基因滞留在加样孔中； 5、通过荧光显微镜观察到CS/P组，FA-CS/P组、US+MB/P组、US+FA-CS/P组和L组有明显绿色荧光，而US+MB+FA-CS/P组只有散在荧光，流式细胞仪检测显示：应用US后，FA-CS/P组的基因转染率升高到（17.13±0.30）%，但低于L组（41±2.51）%和US+MB/P组（21.13±5.5）%，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而联合应用US和MB后，FA-CS/P组的转染率下降至（2.0±0.2）%，明显低于CS/P组，FA-CS/P组、US+MB/P组、US+FA-CS/P组和L组，差异具有统计学意义（P＜0.05），与C组、P组相比无统计学差异（P＞0.05）。 6、CCK-8实验显示CS/P纳米粒和FA-CS/P纳米粒对293T细胞的活力无明显影响，分别为（90.3±2.5）%、（87.2±1.0）%，与单独质粒处理组[（94.7±2.7）%]相比无统计学差异（P＞0.05），明显高于脂质体转染组[（75.9±2.8）%]，差异具有统计学意义（P＜0.05）；联合US辐照后，FA-CS/P转染组的细胞活力下降至（80.4±1.9）%，与FA-CS/P纳米粒和L转染组无明显差异（P＞0.05），但高于US+MB/P组[（70.6±1.6）%]和US+MB+FA-CS/P组[（64.1±4.6）%]，差异具有统计学意义（P＜0.05）；US+MB+FA-CS/P转染组的细胞活力最低，为（64.1±4.6）%，与其他各组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论： 本研究成功合成 FA-CS，并采用复凝聚法，通过优化反应条件制备了粒径小、分散均匀的FA-CS纳米粒，其可被293T细胞有效吸收；FA-CS能与质粒有效结合，形成粒径较小、分散均匀的纳米粒，具有较高的包载率；超声辐照可提高FA-CS纳米粒的基因转染率，但超声和微泡联合应用后，FA-CS纳米粒的基因转染效率明显下降，微泡、超声和FA-CS纳米粒联合应用可能不存在协同作用。