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目的:铜绿假单胞菌为革兰阴性杆菌,分布广泛,是最为常见的机会致病菌和医院感染病原菌之一。本课题研究不同类型感染性疾病标本中铜绿假单胞菌分离率及其感染状况以及铜绿假单胞菌临床分离菌株对不同抗菌药物的耐药率,以期为临床更有效地诊治铜绿假单胞菌感染性疾病提供依据。方法:1.收集浙江大学医学院附属邵逸夫医院2017年1～12月急诊或住院感染性疾病病人痰液、切口分泌物、尿液、腹水、胆汁、血液等标本。2.采用分离划线接种法从不同临床标本中分离并获得菌落,挑取单个菌落常规培养增菌。3.采用VITEK-2 Compact全自动细菌分析仪和GN细菌鉴定卡以及MALDI-TOF质谱法对不同菌株进行鉴定。4.采用铜绿假单胞菌16S rRNA基因特异性引物EX-Taq高保真PCR对铜绿假单胞菌分离菌株再鉴定。5.采用VITEK-2 Compact全自动细菌分析仪和AST-GN药敏鉴定卡以及K-B纸片扩散法检测铜绿假单胞菌临床菌株对17种抗菌药物的敏感性。6.根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)、欧洲药敏试验委员会(EUCAST)和美国食品药品监督管理局(FDA)文件及判定折点设计多重耐药模式分析标准。7.以SPSS20.0为工具,对统计样板进行卡方检验和多重变量对应分析,分析上述铜绿假单胞菌临床菌株对不同抗菌药物耐药率以及优势多重耐药模式。结果:1.从859例感染性疾病标本中分离出199株铜绿假单胞菌,199株铜绿假单胞菌基因组DNA中均能扩增出预期大小的16S rRNA基因片段(1425bp)。2.199例铜绿假单胞菌感染病人中,以肺炎等下呼吸道感染最为常见(35.7%,71/199)(χ2=24.8,p<0.05),其次为皮肤感染(14.1%,28/199)、腹腔感染(13.1%,26/199)、泌尿道感染(13.1%,26/199)、上呼吸道感染(10.0%,20/199)和胆道感染(7.5%,15/199)(χ2=4.0,p<0.05),耳道、血液和其他感染仅占7.5%。3.199例铜绿假单胞菌感染病人中,62.8%(125/199)为男性,37.2%(74/199)为女性。病人年龄范围22～97岁,其中69.3%(138/199)病人≥60岁(χ2=59.5,p<0.05)、21.1%(42/199)病人 41～59 岁、9.6%(19/199)病人 20～40 岁。4.199例铜绿假单胞菌感染病人中,27%(54/199)来自重症监护病房、26%(51/199)来自普外科,显著多于其他科室(χ2=17.7,p<0.05)。5.药物敏感试验结果显示,铜绿假单胞菌对妥布霉素和丁胺卡那霉素敏感率分别为95.48%和93.47%,其次为庆大霉素(88.44%)、左旋氧氟沙星(72.36%)和哌拉西林(70.51%),但对复方新诺明、头孢唑林、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、米诺环素、头孢曲松耐药率较高,分别为99.50%、98.99%、98.48%、97.99%、97.80%和 95.48%。6.55.3%铜绿假单胞菌临床分离菌株(110/199)多重耐药,优势多重耐药模式为:30.9%(34/110)菌株对青霉素+头孢菌素+碳青霉烯类耐药、39.1%(43/110)菌株对青霉素+头孢菌素+碳青霉烯+喹诺酮类耐药(χ2=25.1,p<0.05)。7.青霉素+头孢菌素+碳青霉烯类与下呼吸感染、胆道感染、皮肤感染、年龄≥60岁男性相关性较强,青霉素+头孢菌素+碳青霉烯+喹诺酮类与腹腔感染、年龄41～59岁或≥60岁男性相关性较强,青霉素+头孢菌素+碳青霉烯+喹诺酮+氨基糖苷类与上呼吸道感染、年龄≥60女性相关性较强,青霉素+头孢菌素+喳诺酮类与血流感染、泌尿道感染、年龄41～59岁男性相关性较强。结论:肺炎是铜绿假单胞菌感染所致主要疾病,≥60岁老年人群为铜绿假单胞菌易感人群,病人多来自重症监护病房和普外科。铜绿假单胞菌临床菌株临床常用青霉素类和头孢菌素类抗菌药物耐药且多重耐药率较高,故分离铜绿假单胞菌感染病人菌株并进行药物敏感试验很有必要。