论文部分内容阅读
目的:探讨壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶作为颅内动脉瘤栓塞材料的可行性。为组织工程方法治疗动脉瘤提供实验依据。方法:利用介入法结合弹力蛋白酶诱导兔颈总动脉,建立兔动脉瘤模型;用酶消化法从兔颈部皮肤中原代分离培养成纤维细胞,确定Brdu标记方法;配制2%(w/v)壳聚糖与56%(w/v)甘油磷酸钠溶液,不同比例混合,测定混合液pH、37℃成胶时间及力学强度,体外观察兔皮肤成纤维细胞在不同配比壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶中生长状态,选择既适合导管内操作又适合成纤维细胞生长的最佳比例;将Brdu标记的成纤维细胞与壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶混合栓塞兔颈动脉,评价组织相容性。最终栓塞兔动脉瘤模型。结果:(1)利用介入法结合弹力蛋白酶诱导兔颈总动脉,建立兔动脉瘤模型,4周时造影,观察动脉瘤宽径平均4.6±0.64mm;动脉瘤长径平均7.2±1.2mm;载瘤动脉即右侧头臂干直径平均4.0±0.72mm。(2)胶原酶消化法及皮片接种法均可获得原代成纤维细胞,其中胶原酶消化法获得种子细胞效率高,更适合组织工程快速大量获得种子细胞的要求。胶原酶消化法在4小时时获得的有活性细胞量最多。Brdu可用于兔成纤维细胞标记,最佳标记方法为5ug/ml标记24小时。(3)当壳聚糖/甘油磷酸钠在7:1时,pH值为7.28,成胶时间为260±18s,力学强度可达14KPa,细胞生存率最高,达(89±2.74)%。体外栓塞玻璃管动脉瘤模型见壳聚糖-甘油磷酸钠经过微导管原位成胶。(4)动物体内实验:颈动脉栓塞,透视下可见混合物显影良好,局部组织切片显示(HE染色):1周时凝胶中散在较多细胞及钽粉,凝胶与血管壁边界较清,内皮细胞完整。4周时凝胶与血管壁边界不清,可见周边凝胶被细胞成分包绕降解。免疫荧光显示:4周标本中可见较多标记的成纤维细胞。兔动脉瘤栓塞术中见动脉瘤不显影,术后3d病理见动脉瘤被凝胶栓塞,内膜细胞形态正常,动脉壁内未见明显炎性细胞侵润。结论:本研究通过优化壳聚糖-甘油磷酸钠配比,构建壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶材料,利用这种材料进行兔颈动脉及动脉瘤模型栓塞。短期观察,证实壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶可用于动脉瘤栓塞。为组织工程方法治疗动脉瘤提供实验依据。