论文部分内容阅读
【目的】通过荧光免疫细胞化学试验、Western blot试验、MTT细胞增殖试验，初步探讨HMGB1、S100对矽肺模型小鼠中成纤维细胞增殖水平的影响。【方法】1)小鼠矽肺模型制备：选用健康雄性昆明种小鼠36只，随机分为SiO2染尘组和生理盐水对照组。SiO2染尘组设3、7、14、21和42天5个观察时点，每组6只。染尘采用气管切开染毒的方式注入SiO2悬液方法，剂量为200mg/Kg，每只注入量为0.1ml.对照组在相同条件下气管切开注入生理盐水0.1ml。2)指标检测：在相应观察时点处死小鼠取肺脏，组织块法进行成纤维细胞培养。待细胞传至第5代，细胞系稳定后进行指标测定。荧光免疫细胞化学法检测肺成纤维细胞内HMGB1和S100的表达；MTT法检测HMGB1和S100干预前后成纤维细胞增殖情况；Western blot检测成纤维细胞内TLR4和RAGE蛋白含量。【结果】1）荧光免疫细胞化学结果显示：HMGB1表达量随着染尘时间的延长逐渐升高且高于正常对照组，差异有统计学意义；S100表达量在3天时与正常对照组无差别，其余时段光密度值逐渐升高且均高于空白对照组，差异有统计学意义。2)MTT细胞增殖实验结果显示：干预因素（无干预、HMGB1干预、S100干预）对矽肺模型小鼠肺成纤维细胞增殖影响不同；时间因素（正常、3、7、14、21、42天时段）对增殖影响也不同；二者存在交互作用。三种干预方式的增殖快慢依次为：HMGB1干预>不加干预>S100干预。3) Western blot结果显示：TLR4表达水平随观察时间的延长明显升高且具有时间效应关系（P<0.05）；RAGE在正常对照组呈现高表达，在3天染尘时段表达量持续升高且高于正常对照组（P<0.05），随即各时段表达量均降低，差异有统计学意义（P<0.05）。【结论】1) HMGB1和S100可能参与矽肺炎症的形成，其生物学效应的发挥不完全依赖RAGE受体，还有TLR4的参与。2）外源性HMGB1促进矽肺模型小鼠肺成纤维细胞增殖；而外源性S100则抑制其增殖。