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目的:1.检测人胰腺癌细胞系PANC-1中DKK-1的表达情况,观察DKK-1 siRNA靶向抑制PANC-1中DKK-1表达前后癌细胞生物学特性的变化;2.检测DKK-1 siRNA干扰PANC-1细胞中DKK-1表达前后癌细胞c-Myc、cyclinD1及TGF-β1基因表达情况变化,并对DKK-1与c-Myc、cyclinD1及TGF-β1的相关性进行分析,探讨DKK-1基因在PANC-1细胞生长侵袭作用中与c-Myc、cyclinD1及TGF-β1基因的关系。方法:1.设计合成3对DKK-1干扰片段(siDKK-1-1、siDKK-1-2、siDKK-1-3),应用RT-PCR方法检测siDKK-1-1组、siDKK-1-2组、siDKK-1-3组PANC-1细胞中DKK-1 mRNA的表达,从siDKK-1-1、siDKK-1-2、siDKK-1-3中筛选出干扰效果最显著的目标片段;并从如下三个方面检测干扰DKK-1表达后PANC-1细胞生物学特性的变化:MTT法检测转染目标片段前后PANC-1细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测转染目标片段前后PANC-1细胞凋亡能力变化,划痕实验检测转染目标片段前后PANC-1细胞运动侵袭能力变化,通过比较三个指标在各组之间的差异,进一步探讨抑制DKK-1表达对PANC-1细胞生物学特性的影响。2.应用RT-PCR法检测DKK-1 siRNA转染PANC-1细胞前后细胞中DKK-1、c-Myc、cyclinD1及TGF-β1基因m RNA的表达;Western-blot法检测DKK-1 siRNA转染PANC-1细胞前后细胞中DKK-1、c-Myc、cyclinD1及TGF-β1蛋白的表达,利用统计软件对转染前后各基因表达的变化进行相关性分析,进一步探讨DKK-1在促进人胰腺癌生长侵袭中与c-Myc、cyclinD1及TGF-β1的关系。结果:1.RT-PCR结果显示转染siDKK-1-1后PANC-1细胞内DKK-1 mRNA表达降低最明显。2.转染si DKK-1-1后PANC-1细胞增殖能力下降、凋亡增加及迁移能力降低,以上实验结果与空白组及NC组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。3.RT-PCR检测结果显示转染siDKK-1-1后PANC-1细胞内c-Myc、cyclinD1及TGF-β1 mRNA表达明显降低(P均<0.05);Western-blot检测结果显示转染si DKK-1-1后PANC-1细胞内c-Myc、cyclinD1及TGF-β1蛋白表达明显降低(P均<0.05)。对上述实验结果进行相关性分析发现DKK-1、c-Myc、cyclinD1及TGF-β1表达两两之间均呈正相关。结论:1.靶向DKK-1 siRNA阻断人胰腺癌细胞PANC-1中DKK-1的表达,可有效抑制PANC-1细胞的增殖、侵袭能力,并诱导细胞凋亡。2.利用DKK-1 siRNA抑制胰腺癌细胞PANC-1中DKK-1的表达,可使c-Myc、cyclinD1及TGF-β1表达下调。3.DKK-1通过影响TGF-β1的表达来调控下游效应基因c-Myc、cyclinD1,从而促进胰腺癌细胞的增殖与迁移,并抑制其凋亡。