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目的利用高分辨率熔解曲线(HRM)分析技术,对四型登革热病毒(DEV)进行快速准确分型鉴定,弥补现有分型方法的不足;利用定量PCR方法,检测登革热患者体内白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素6(IL-6)、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α) mRNA的表达水平,阐明人体在登革热病毒感染期,体内固有免疫和适应性免疫的情况。方法1.根据NCBI公布的序列,设计HRM分型引物,对不同型别登革热进行分型鉴定,并进行灵敏度和特异性试验,同时采用测序、荧光PCR和普通PCR方法,对HRM分型结果进行验证试验。2.对21例登革热患者和21例健康对照者采集静脉血,用比较CT值法(2-ΔΔCT),检测IL-12、IL-10、IL-6、IFN-γ、TNF-α mRNA的表达水平,分析登革热患者相关细胞因子mRNA变化情况及其与健康对照组之间的差异。结果1.应用HRM分析技术,可对四型登革热病毒进行准确分型,灵敏度高,特异性强,HRM分型结果与测序、荧光PCR和普通PCR分型结果无异。2.登革热患者体内IL-12、IL-10、IFN-γ、TNF-α mRNA的表达水平较健康对照组显著升高,有显著性差异(P<0.01,0.05,0.01,0.05)；IL-6 mRNA的表达水平较健康对照组有所降低,但无显著性差异(P>0.05)。结论1.本研究建立了登革热病毒PCR-HRM分型检测方法,与测序、荧光PCR和普通PCR相比,该方法为登革热分子诊断提供了一种更为快速、准确、廉价的检测方法。2.登革热病毒(DEV)感染可以导致患者体内IL-12、IL-10、IL-6、IFN-γ、 TNF-a五种细胞因子mRNA表达水平的变化,这些细胞因子可能在登革热的发病机制和免疫调节中发挥作用。3. Th1/Th2细胞因子失衡,在登革热患者感染过程和疾病转化中可能发挥重要作用。登革热患者IL-12 mRNA升高可以促进Th1类细胞因子分泌并抑制Th2类细胞因子分泌,发挥Th1免疫应答优势。