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蛋白质的糖基化作用普遍存在于真核细胞当中,对蛋白质的结构与生物功能有着非常重要的影响,例如细胞的辨别能力。近年来的研究发现,许多疾病的发生都与连接在蛋白上的糖的变化有关,如发炎,免疫介质引发的疾病,肿瘤,先天性糖基化综合征等。因此糖类的定性和定量分析对于发现疾病相关的特征信息显得十分必要。然而对糖链的定量分析中,由于标准品十分匮乏,故相对定量技术被广为关注。目前对N-糖链最有效的分析方法是进行化学标记然后进行质谱检测,而最好的内标同位素一般则是13C,D,‘5N。为了对糖蛋白研究更加深入透彻,不仅仅需要对糖链部分加以研究,对多肽的分析和研究也是必不可少的。肽链和糖链的研究相结合,对糖蛋白整体的分析十分有意义。近期的报道,Endo-M酶及其变异后的Endo-M-N175Q酶可以切断糖蛋白和糖肽N-糖链中两个N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)之间的β1-4糖苷键,从而释放N-糖链和带有GlcNAc的蛋白或多肽,同时将寡糖链转移到带有GlcNAc基团的受体上,在两个新的GlcNAc之间形成新的糖苷键,最终得到新的标记糖蛋白或糖肽衍生物。基于这样的手段,本文在第二章中设计并合成了4对可提高质谱检测灵敏度和分辨率的轻、重稳定同位素标记的受体,对各个受体加以表征,并且将其简单的应用于酶反应中,得到了理想的转糖基产物。为了对糖蛋白的研究更加深入透彻,N-糖肽的多肽部分的研究也十分重要。本文第三章中,设计了5种同位素标记衍生化试剂,可以解决一级质谱在多肽分析中难以超过4重标记的瓶颈。在实验中,我们成功合成了两种轻重同位素标记衍生化试剂d0/d3-MPPZ,与多种氨基酸在相同条件下进行衍生化反应,探索最佳反应条件。由于氨基酸携带有氨基末端,我们合成的新型同位素标记衍生化试剂d0/d3-MPPZ则针对其氨基末端进行反应。本文以唾液酸糖肽SGP作为N-糖肽的实际样品,以等量的同位素标记衍生化试剂进行衍生,得到产物进行LC-MS分析检测,得到稳定衍生化产物,质谱丰度和提取色谱峰面积比值为1：1,证明该衍生化试剂可以应用于多肽的相对定量研究中。该衍生化过程,标记简单,衍生化反应条件温和,反应程度较为完全,副产物少,标记产物稳定,试剂廉价等特点,为以后进行分子量更大的,结构更加复杂的糖蛋白研究提供实验依据。