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肾综合征出血热(HFRS)是由汉坦病毒(Hantavirus,HV)引起的一组急性病毒性传染病,临床上以发热、出血及肾损害为主的一种自然疫源性疾病。全世界均有流行,我国是高发区,约占世界发病总数的90%以上,全国30个省市自治区均有本病的流行,近十年来,年报告发病人数4~6万人。汉坦病毒在全世界广泛分布,自1976年分离到该病毒以来,不断有新的汉坦病毒被发现,到目前已有28个汉坦病毒血清型/基因型。我国至少存在2个血清型,即HTN型(姬鼠型)和SEO型(家鼠型)。小型啮齿类动物为本病毒的主要贮存宿主,不同的汉坦病毒有不同的贮存宿主,黑线姬鼠为姬鼠型病毒的主要宿主,常引起重型出血热,病死率约为3~5%;褐家鼠为家鼠型病毒的主要宿主,常引起轻型出血热,病死率约为1%。本病主要通过接触带病毒的宿主动物及其排泄物受感染。HV属布尼亚病毒科(Bunyaviridae),是一种有包膜病毒,其基因组为单股负链RNA,含大(L)、中(M)、小(S)3个基因片段,分别编码多聚酶(polymerase)、包膜糖蛋白(glycoprotein)G1和G2、核蛋白(nucleocapsid protein,NP)。S基因长全约1.6~1.8Kb,3’与5’端各有一个非编码区,只有一个开放读码框架,编码一个分子量在48~50kD的核蛋白。尽管RT-PCR能检测汉坦病毒特异性核酸,可用于HFRS的早期诊断,但由于急性期患者病毒血症持续时间短、滴度低而难以检出,故检测特异性抗体的血清学检查,仍是目前HFRS的主要确诊方法。目前血清学检测所用抗原主要是由病毒感染细胞后收获制备而成,由于汉坦病毒具有较强的传染性,培养病毒需要在生物安全实验中进行,加上病毒在细胞中繁殖滴度低,难以获得大量的病毒抗原。研究发现HV病毒感染机体后,首先诱导产生较高水平的IgM抗体,随后产生IgG抗体,而早期抗体主要是由NP诱导产生的。因此,许多国内、外学者构建了多种表达系统来表达NP,作为HFRS的血清学诊断抗原。目前所用HFRS血清学试验,主要是基于病毒或表达核蛋白为抗原的IgM捕捉ELISA,此法有四个主要步骤,操作烦琐、费时。因此,建立快速、简便、安全、敏感和特异的HFRS血清学诊断新方法有重要意义。本研究以含有生产肾综合征出血热疫苗的Z10毒株全长S基因的质粒为模板,通过高保真PCR亚克隆S基因核蛋白编码区,通过序列测定,分析它与国内外汉坦病毒分离株的同源性,以确定它的代表性。构建Z10株NP原核表达系统pET28a-Z10N-E.coli BL21DE3,表达重组核蛋白(rNP)。ELISA法检测表达情况,通过离子交换法和Ni-NTA亲和层析法提纯rNP,SDS-PAGE了解rNP纯化情况,Western blot检测rNP的特异性免疫反应。并以提纯的重组NP为抗原,直接标记辣根过氧化酶(HRP),建立IgM直接捕捉ELISA。通过检测95份HFRS患者血清(临床表现典型,经传统的免疫荧光法证实)及部分健康者血清,与HV为抗原的常规IgM捕捉ELISA法进行比较,符合率为97.78%,两种IgM捕捉ELISAs法的阳性率分别为94.73%和92.63%,表明快速、简便、安全的rNP-IgM直接捕捉ELISA与HV-IgM间接捕捉ELISA对HFRS患者血清样品具有相同的检测效果。