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目的1鉴定并解析编码ACBPs中另一活性组分gMYL6的遗传信息,获取gMYL6全序列信息。2构建以大肠杆菌为宿主的gMYL6生物合成体系,通过添加聚阳离子氨基酸标签的方式对gMYL6进行可溶性表达,以期产生具有更高溶解性的gMYL6重组蛋白。3对gMYL6及其重组蛋白进行NK细胞杀伤活性的评价,检测其对NK细胞杀伤活性的影响。方法1采用液质联用系统(EASYnLCII-Nano-HPLC)、以Xcalibur 2.0.7软件辅助获取多肽数据,通过对多肽数据进行NCBInr数据库搜索结合BLAST分析,获取gMYL6的生物合成信息。2以E.coli BL21(DE3)为表达宿主、pET21a(+)为表达载体,在gMYL6多肽序列末端添加不同长度的聚阳离子氨基酸标签(1~10个赖氨酸、1~10个精氨酸),构建gMYL6的异源生物合成体系,对重组蛋白进行SDS-PAGE及定量分析。同时设置不同诱导温度,观察温度对gMYL6及gMYL6-6K表达的影响。3通过CCK8法和流式细胞术检测gMYL6及gMYL6-6K对NK细胞杀伤活性及细胞表型的影响。结果1通过2D-nano-LC-ESI-LTQ-Orbitrap MS/MS技术和BLAST分析成功获取gMYL6编码基因。2依据gMYL6的生物合成信息结合其可溶性表达策略,成功诱导表达并获得gMYL6蛋白及其重组蛋白。SDS-PAGE分析及定量分析发现其中在C端添加1R、9R、6K、9K和10K标签的gMYL6重组蛋白的表达量明显高于gMYL6,最高可达到23.7425 mg/L。在不同温度(18℃,30℃)下对gMYL6及gMYL6-6K进行诱导表达结果显示,18℃条件下诱导表达量略微高于30℃条件。3CCK8法和流式细胞术检测结果显示,当给药浓度为25μl时,gMYL6及gMYL6-6K可提高NK细胞杀伤活性、CD16~+CD56~+细胞百分比以及CD107a~+NK细胞百分比。结论1通过串联质谱法能够快速、有效地获取gMYL6相关碎片信息。2采用添加聚阳离子氨基酸标签的方式,能够改善gMYL6的可溶性表达。3gMYL6及gMYL6-6K具有提高脐血来源NK细胞杀伤活性的功能。