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癌症是一种因细胞增殖失控而引发的严重疾病。全世界每年的死亡人数中每100,000人中至少有100到350人死于癌症;而在中国每年的疾病死亡人口中有高达1/5的人是死于癌症及其相关疾病。癌症的治疗一直是各国医学工作者所热切关注的研究课题。湿生扁蕾是龙胆科(Gentianaceae)扁蕾属(Gentianopsis plaudosa Ma)一年生草本植物,主要分布在中国,印度,尼泊尔,不丹及锡金等国。作为一种传统中药,该植物在青藏高原地区被广泛运用,临床主要用于肝炎,肠胃炎,结膜炎,急性肾盂肾炎等症的治疗。近年来,随着湿生扁蕾有效成分研究的深入,其新的药效成分及功效也不断被发现。本研究对藏药湿生扁蕾中四种口山酮化合物的抗癌活性进行了筛选(1,8-二羟基-3,7-二甲氧基口山酮(Compound 1)、1-羟基-3,7,8-三甲氧基口山酮(Compound 2)、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基口山酮(Compound 3)、1-0-β-D-葡萄糖苷-7-羟基-3.8-二甲氧基口山酮(Compound 4))。利用SRB法对四种化合物的细胞毒性进行了检测;并通过集落形成法,台盼蓝排染法, AO/EB双染法,DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术对四种化合物的体外细胞增殖抑制能力和诱导细胞凋亡的能力进行了系统检测;并对四种化合物的构效关系进行了系统分析。结果显示,Compound 1~4对HepG2细胞和HL-60细胞具有较强的细胞毒性,能够显著抑制两种细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡。其毒活性趋势为:HepG2细胞中,Compound 3>Compound 2> Compound 4> Compound 1;HL-60细胞中,Compound 2>Compound 3> Compound 4> Compound 1。通过对其构效关系分析,结果显示口山酮结构中C-8位的甲氧基较羟基具有更强的细胞毒贡献;而对于Compound 4的C-1位糖基而言,可能因其较大的空间位阻使得Compound 4的活性发生了明显下降。此外,本研究对上述四种化合物中抗癌活性最强的化合物Compound 2的抗癌机理进行了进一步的研究。其中形态学观察及台盼蓝排染法结果显示,当低浓度的Compound 2 (12.4 to 74.4μg/ml)处理HL-60细胞后,细胞呈现出明显的时间剂量依赖性生长抑制。流式细胞术分析结果显示,不同浓度Compound 2能够分别使细胞阻滞在G1期及G2/M期。AO/EB双染实验,DNA琼脂糖凝胶电泳实验及流式细胞术分析实验的结果显示,高浓度的Compound 2 (82.7 to 330.8μg/ml)能够诱导HL-60细胞发生明显的凋亡现象。另外,彗星电泳结果显示,Compound 2对HL-60细胞具有较强的DNA损伤作用。简言之,所有结果表明,Compound 2对HL-60细胞具有明显的细胞毒性,能够诱导该细胞发生时间和剂量依赖性的生长抑制及细胞凋亡。其可能的抗癌作用机制为Compound 2引起了HL-60细胞不同程度的DNA损伤,从而使低浓度Compound 2处理的HL-60细胞阻滞在G1期,而高浓度Compound 2处理的HL-60细胞阻滞在G2/M期,并进一步引发了细胞的增殖抑制;同时高浓度的Compound 2也引起了HL-60细胞不可逆的DNA损伤,并最终导致了细胞凋亡的发生。