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食品安全是食品中有毒有害物质对于人体健康影响的重大公共卫生问题。食源性致病菌是引起食品安全的最主要的来源。其中单增李斯特菌是一种极其常见的致病菌,可引起脑炎、脑膜炎、败血症、脓肿及孕妇流产等一系列食源性李斯特菌病,病死率较高,可达30%-70%。目前传统的细菌培养方法存在费时耗力等缺点,常规PCR方法有前处理时间长、易污染实验室环境等缺点。因此,建立食品中单增李斯特菌的快速、准确、可靠的检测方法具有非常重要的实际意义和应用价值。本研究应用免疫磁珠分离技术,从污染菌很少的样品中快速富集单增李斯特菌,以集菌方法代替增菌培养,结合实时荧光PCR检测,提高单增李斯特菌的检出率,缩短检验时间,提高检测效率。本实验通过比较EDC/NHS浓度、活化时间、抗体浓度、偶联时间和偶联温度等条件对免疫磁珠捕获单增李斯特菌效率的影响,确定免疫磁珠制备的具体流程：将磁珠用PBST (pH=6.0)清洗,加入475μLPBST (pH=7.4)和25μL1mg/mL抗体,室温下孵育2h后,分离,并封闭。再通过比较检测过程中免疫磁珠用量、富集时间和洗涤液pH,确定最佳条件：将100μ L的免疫磁珠加至100μ L的菌液中,在28℃、180rpm恒温摇床中孵育1h后,置于磁力架上进行分离,弃去上清液,用500μL PBS(pH=7.4)重复洗涤3次,最后用50μL PBS (pH=7.4)重悬,用于下一步实验。将免疫磁珠富集分离的单增李斯特菌提取DNA模板后,用实时荧光PCR检测,检测条件经优化后选择：PCR反应体系：Premix Taq:12.5μL, ROX reference Dye:0.5μL,上游引物(10pmol/mL):1μL,下游引物(10pmol/mL):1μL, Taqman探针(10pmol/mL):1μL,双蒸水：4μ L,DNA模板：5μ L,总体积为25μ L。PCR温度设置：第一阶段：95℃,2min;第二阶段：95℃,5s,60℃,35s,进行40个循环。本方法可以实现102～106CFU/mL检测范围内线性相关度良好,最低检测限为80CFU/mL。应用于四大类九种食品：水产(海鱼、虾仁),肉类(生猪肉、香肠),蔬菜(生菜、黄瓜、番茄),奶类(牛奶、奶酪),实验结果表明IMBS-real time PCR法可以快速实现定量检测,且特异性和灵敏性较高,与传统培养方法相比,可以有效缩短检测周期,提高检测效率。