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金黄色葡萄球菌在生活环境中广泛分布,可污染肉类、水产品、乳制品及动物饲料,进而引起人或动物的严重呕吐、腹泻等临床症状,造成巨大的经济损失。传统检测金黄色葡萄球菌方法成本高,耗时长,过程繁琐,实用性较低,无法控制其对食品的污染。因此亟需建立金黄色葡萄球菌灵敏、便捷的检测方法,提高食品卫生水平,保障人民的生命财产安全。本研究基于点击化学、HCR、纳米花等技术与可视化信号输出平台相结合,通过对反应体系中的最佳探针浓度,最佳孵育时间等反应条件的优化,并进行特异性与灵敏性的双重评价,建立针对金黄色葡萄球菌灵敏、特异的可视化检测方法,具体实验结果如下:(1)试纸条与无亚铜离子催化点击化学结合对金黄色葡萄球菌的可视化检测本研究将无亚铜离子催化点击化学与试纸条结合,建立金黄色葡萄球菌可视化检测方法,条件优化出CCLCR的两段探针最佳浓度为50 n M,最佳连接温度为25℃,该方法能够特异性识别金黄色葡萄球菌靶标序列,灵敏的检测出10 f M的标准序列。对污染牛奶样品中标准序列的检出率在86%~90%之间,通过肉眼便可观察结果,为实现实际样品的可视化检测提供良好的基础。(2)微孔板显色结合HCR对金黄色葡萄球菌的可视化检测本研究将微孔板显色与HCR技术相结合,建立金黄色葡萄球菌可视化检测方法,条件优化出抓取探针最佳孵育浓度为0.5μM,最佳孵育时间2 h,HCR产物的不修饰探针/修饰探针的体积比为1:9,最佳孵育时间2 h。设计的检测方法可以区分一个碱基差异的序列,最低检测限32.5 f M;有良好的特异性,对金黄色葡萄球菌的最低检测限可以达到52.1cfu/ml。(3)纳米花与亚铜离子催化点击化学结合对金黄色葡萄球菌的可视化检测本研究将纳米花颗粒与铜催化的点击化学技术相结合,建立金黄色葡萄球菌可视化检测方法,通过对实验条件进行优化,得出孵育抗体最佳浓度为5 mg/ml,孵育最佳时间为2h,抗坏血酸盐浓度为25 m M,并具有较好的特异性效果,对金黄色葡萄球菌最低检测限可达到102 cfu/ml。综上所述,本研究将点击化学、HCR、纳米花等技术与可视化信号输出平台相结合,建立三种针对金黄色葡萄球菌可视化检测方法,通过对三种检测方法进行特异性、灵敏性的检测评价,最终确保能够的检测出金黄色葡萄球菌,成功实现针对金黄色葡萄球菌的可视化检测,并且其具有室温下操作,检测结果容易判断,不需要精密仪器配合,降低了检测成本等优点,显著增加了检测的实用性,为实现食源性病原菌的POCT检测提供了良好的发展方向。