癫痫是神经系统常见病,患病率在 5‰左右,对人类健康危害极大。探索安全有效的抗痫措施,是一个世界性的难题之一。长期以来,应用针刺治疗癫痫有一定的临床疗效。我室以往工作表明,电针有抗痫作用,其作用可能与抑制兴奋性氨基酸系统活动及增强抑制性氨基酸递质的释放有关;电针抗痫还与内阿片肽系统有关,可能通过抑制海马内脑啡肽系统的活动、增加强啡肽系统的活动来发挥其抗痫作用。 孤啡肽( Nociceptin/Orphanin FQ, OFQ )是 1995 年国际上两家实验室同时发现的一种阿片受体( opiod receptor-like receptor 1, ORL1 )的内源性配体,它参与调节体内多种生理活动。研究表明,在与癫痫密切相关的脑区,如:皮层、杏仁核和海马等区域,都有 OFQ 的分布。癫痫发生后,大鼠脑内 proOFQ mRNA 及 ORL1mRNA 水平有所改变。此外,OFQ 还可抑制包括谷氨酸在内的多种神经递质释放,而谷氨酸在癫痫的发病机制及癫痫发作中起着重要的作用。同时,OFQ 可以抑制包括 T 型 Ca2+电流在内的多种类型的 Ca2+电流,而降低 T 型 Ca2+电流是许多抗痫药物的作用途径。 以往这些研究表明,OFQ 可能参与癫痫的发病机制以及针刺的抗痫机制。但关于 OFQ 对癫痫的直接作用,目前研究不多。有人认为 OFQ 对癫痫有一定的抑制作用,但也有人认为 OFQ 并无抗痫作用,另外还有人认为 OFQ 促痫作用。因此进一步明确 OFQ 对癫痫发作的影响,揭示 OFQ 在针刺抗痫中的作用,初步探索 OFQ 参与针刺抗痫的机制,就是本课题的研究目的。 本课题在大鼠青霉素致痫模型上,采用电生理、免疫组织化学、RT-PCR 及Western Blot 等技术,对 OFQ 是否抗痫及是否参与针刺抗痫进行研究。主要实验结果如下: 1. 脑电功率谱记录表明,青霉素致痫时脑电出现大量尖波和棘波,呈 明显痫样放电形式。脑电功率谱幅度增大,频谱右移。与注射前相比,致痫 2<WP=7>后各时间点总功率及各频段功率均显著增加。侧脑室给予不同剂量 OFQ( 0.055 nmol, 0.55 nmol, 5.5 nmol )对基础脑电及其功率没有影响,但对青霉素所致痫样发作有抑制作用。随着浓度增大,OFQ 对青霉素诱发的脑电功率的抑制作用也增强。OFQ 受体拮抗剂[Nphe1]Nociceptin(1-13)NH2及功能性拮抗剂 Nocistatin 可以阻断 OFQ 对青霉素所致痫样发作的抑制作用。以上结果表明,外源性给予 OFQ 能剂量依赖性抑制青霉素所致痫样发作,这种抑制作用与其受体有关。 2. 电针可以显著减弱青霉素造成的痫样发作,电针组脑电总功率较单纯致痫组相比显著降低。此外,电针还可以抑制致痫后 δ 波、θ 波,及β波的功率。其中,对高频 β2 波 ( 18 ~ 30 Hz )的抑制最为明显。给予 OFQ 受体拮抗剂,可以阻断电针对青霉素所致痫样发作的抑制,而 OFQ 功能性拮抗剂Nocistatin 不能阻断电针对痫样发作的抑制。与单独使用电针或 OFQ 相比,OFQ 与电针合用后,对青霉素所致痫样发作的抑制有增强的趋势。这些结果提示,OFQ 参与了电针抗痫,它在电针抗痫中的作用是通过其受体实现的。 3. RT-PCR 结果表明,致痫 2hr 后大鼠海马 ppOFQ mRNA 表达较正常大鼠显著减少,而电针后,大鼠海马 ppOFQ mRNA 表达较致痫组显著增加,接近正常水平。免疫组化结合光密度图像分析显示,在海马 CA1、CA2、CA3区,致痫 2hr 后 OFQ 免疫阳性神经元及纤维显著减少,而电针可以缓解这种减少。在致痫组,免疫阳性面积百分比较对照组显著降低,而电针可使之恢复。Western Blot 结果表明,致痫 2hr 后大鼠海马 OFQ 受体 ORL1 蛋白的表达较正常大鼠显著减少,而电针后,大鼠海马 ORL1 蛋白表达较致痫组显著增加,接近正常水平。以上结果进一步提示,电针抗痫过程中,有 OFQ 的参与,电针可能通过调节脑内 OFQ 系统水平而起到抗痫作用。综上所述,我们的结果提示:OFQ 有抗痫作用,它参与了电针抗痫,其作用与其受体有关,电针可能通过调节脑内 OFQ 系统水平而起到抗痫作用。