长白山自然保护区土壤真菌弯颈霉属真菌遗传多样性及分布规律研究

来源 :辽宁师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaosheng2099
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长白山自然保护区是亚欧大陆保存较完整的生态系统,是研究物种多样性的理想之地。2013年和2014年6、7、8和9月赴长白山自然保护区北坡,依据不同森林类型和土壤类型采用“之”字形多点采样法,在海拔800-2650m区域内采集土壤样品324份。以稀释平板法和形态学鉴定法,共分离得到133株弯颈霉。  通过对弯颈霉属(Tolypocladium)真菌在长白山的生态分布分析,发现其种类与数量的分布特点:从海拔1500-1800m逐渐增加,从1800-2000m逐渐减少,从2000-2600m逐渐增加,在2600m以上没有分离到;从6月至8月份离到的弯颈霉的数量逐渐下降,9月又有所回升,但是较7月份少。  对133株弯颈霉进行了分子生物学鉴定及18S rDNA-ITS和延长因子(elongationfactor1-α)的核酸序列对比分析。结果表明,利用18S rDNA-ITS序列所建的系统发育树与Blast结果并不一致;与18S rDNA-ITS序列分析相比,依据延长因子核酸序列所建的系统发育树,其鉴定结果更准确。  利用ISSR分子标记技术,对133株弯颈霉属真菌进行了遗传多样性分析。从40个通用引物中筛选出了10个稳定性及多态性好的引物,鉴定结果表明,ISSR表现出很高的遗传多态性,多态性条带达到79%,且扩增结果有很好的重复性;无论是海拔还是月份各居群间群体遗传变异较小,这可能是由于弯颈霉生态适应强,即海拔和采集时间(月份)对弯颈霉的遗传变异并没有明显的影响。  通过对三种弯颈霉(雪白弯颈霉、柱孢弯颈霉、地生弯颈霉)的生长培养基、pH、光照、氮源和碳源等生物学特性的研究发现,在同一环境下,最适光照条件为光暗交替(12h),最适合培养基为PDA,孢子萌发的最适碳源为葡萄糖,最适氮源为硫酸铵;三者不同的是:三种弯颈霉中,雪白弯颈霉(Tolypocladium niveum)的长势始终最好,产孢量也总体偏高。雪白弯颈霉的最适培养基为PDA,最适温度为25℃,对酸度不敏感,当pH为7时,产孢量最大。其菌落生长最适合碳源为葡萄糖,最适氮源为硝酸钠;地生弯颈霉的最适培养基为MEA,最适温度为30℃,最适pH值为6。其菌落生长最适碳源为葡萄糖,最适氮源为柠檬酸铵;柱孢弯颈霉的最适培养基为PDA,最适温度为25℃,柱孢弯颈霉的生长对酸度不是特别明显。最适碳源为葡萄糖,最适氮源为硝酸钠。
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