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目的：低温脂肪酶因具有低温高催化活性，对热敏感以及耐有机溶剂等特性，在食品、洗涤、脂类加工、制药以及低温环境修复等方面有着广泛的应用前景。目前低温脂肪酶大多来自于低温微生物，而自然界中分布着极其丰富的各类极端环境，在这些极端环境中蕴藏着类型多样的极端环境微生物资源。低温微生物会为了适应低温环境而合成、分泌大量的低温酶类。本文旨在从天山冰川冻土层中分离产低温脂肪酶菌株，并挑选一株高产菌株，进行初步鉴定及其产低温脂肪酶的条件探讨。为挖掘不同环境下低温脂肪酶产生菌，获得具有新特性的高酶活力的脂肪酶奠定更坚实的基础。方法：本实验依托新疆独特的地理环境，利用Rhodamine-B、Tween-80不同的培养基对采自新疆天山一号冰川冻土层中的菌株进行分离、纯化，结合棕榈酸对硝基苯酯（p-NPP）比色法，筛选出产低温脂肪酶酶活较高的菌株，挑选一株研究其生长特性及常规生理生化特性，并结合16S rDNA基因序列初步确定其所属菌属。再利用响应面法对菌株产酶条件进行优化，最后对所产低温脂肪酶进行初步纯化及其酶学性质研究。结论：1、本实验利用Rhodamine-B、Tween-80不同的培养基从新疆天山一号冰川冻土中，分离筛选得到产脂肪酶的菌株有75株，经过进一步的复筛，获取一株产脂肪酶酶活力较高的菌株，经过形态学观察、生理生化实验以及16S rDNA序列同源性分析，该菌株为假单胞菌属，命名为Pseudomonas sp.T1-39。2、通过菌株最适生长温度等实验，其最适生长范围为16℃~30℃，属于耐冷菌范畴。在摇瓶发酵的基础上，对Pseudomonas sp.T1-39产酶条件进行了优化。进行单因素实验，探究碳源、氮源、金属离子、诱导剂以及温度、初始pH、发酵时间等不同因素对产酶的影响，确定最佳产酶培养基的单因素水平：可溶性淀粉5.0g/L，胰蛋白胨：硫酸铵（1:1）10.0g/L，橄榄油乳化液40mL/L，MgSO4·7H2O2.0g/L，K2HPO42.0g/L。培养温度16℃，培养基初始pH值9.0，接种量2%，装样量20mL/250mL，发酵培养32h达到产酶高峰，另摇床转速在180rpm。3、单因素结果的基础上，利用Plackett-Burman设计筛选出对发酵酶活影响最大的三个因素：温度、胰蛋白胨和初始pH。再通过最陡爬坡实验确定最大产酶区域，并以该区域为中心点进行Box-Benhnken响应面设计。确定出实际值，温度17℃，初始pH为8.5，胰蛋白胨4.6g/L，优化后脂肪酶的酶活达10.71U/mL。是优化前的3.42倍。4、对Pseudomonas sp.T1-39所产脂肪酶进行硫酸铵沉淀，并对初步纯化后的脂肪酶进行酶学性质研究。结果表明：Lip-39的最适反应温度为30℃，在20℃处理1h后，酶活仍保持70%左右，60℃处理30min酶活不到40%，对热敏感，属于低温脂肪酶脂肪酶范畴。最适pH为9.0，pH在7.0~9.0范围内酶活相对比较稳定。金属离子Mg2+、Zn2+、Ni2+、Ba2+对该酶有明显的激活作用，10mmol/L的金属离子螯合剂对Lip-39酶有着强烈的激活作用。有机溶剂正己烷对酶的活力有显著的激活作用。