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目的:心肌缺血性疾病(ischemic heart diseases,IHD)是临床常见的心血管疾病,其发生率和死亡率逐年上升,严重危害人类健康。临床上一般采用药物溶栓、动脉搭桥术、经皮腔内冠脉血管成形术等手段恢复缺血心肌的血液灌注和营养支持。但传统的再灌注治疗方法在恢复心肌供血的同时,随之而来的心肌缺血/再灌注损伤反而会加重心脏的功能和结构损伤。因此,有关抗心肌缺血/再灌注损伤研究一直是生物医学领域研究的热点之一。目前研究发现,药物预处理对心肌缺血/再灌注损伤有一定的保护作用。我国中药资源丰富,在其中寻找和发现能有效保护心脏对抗缺血/再灌注损伤的药物具有重要的临床实用价值。
大黄素是中药大黄的有效单体成分,其化学名称为1,3,8-三羟基-6甲基蒽醌。传统中医认为大黄具有泻下的功效。近年来,随着国内外对大黄素药理作用的大量研究,发现其还有抗菌消炎、抗肿瘤、保护心脑血管等作用。目前,有关大黄素对心肌缺血/再灌注损伤作用的研究较少,且其机制尚不明确,因此,本研究旨在通过Langendorff大鼠心脏离体灌流技术观察大黄素对心肌缺血/再灌注损伤的作用,并探讨其可能的机制。
方法:健康成年雄性SD大鼠,体重270-320g,随机分为4组,每组6只,分别为:空白对照组(Control),大黄素处理组(Emodin),大黄素+格列本脲处理组(Emodin+glibenclamide),大黄素+5-HD处理组(Emodin+5-HD)。大鼠经戊巴比妥钠麻醉后,迅速开胸取出心脏,悬挂于Langendorff离体心脏灌流装置上,以80mmHg灌流压进行恒温、恒压逆向灌流。将液体小囊插入左心室,室内压力通过压力换能器输入记录系统,描记离体大鼠心脏功能。心功能指标包括:左室发展压(left ventricularsystolic pressure,LVDP)、左室舒张末压(left ventricular end diastolicpressure,LVEDP)、左室压力最大变化速率(maximal positive and negativevelocity of left ventrichlar pressure,±LVdp/dtmax)和冠脉流量(coronary vflow,CF)。离体心脏先以K-H液平衡灌流30min,使心脏活动达到稳定。然后夹闭灌流通路,造成全心缺血30 min,随后再灌注120 min。 Emodin组动物于术前24h通过腹腔注射,按照1mg/100g剂量给予大黄素预处理;Control组动物注射等量溶剂;Emodin+Gli组和Emodin+5-HD组动物除接受大黄素注射外,于缺血前10min分别给予离体心脏含格列本脲及5-HD的K-H液灌注。分别观察、记录再灌注不同时间点(5min、10min、20min、30min、60min)的心功能指标变化;收集复灌5min和60min冠脉流出液,分光光度计法测定其乳酸脱氢酶(LDH)含量;继续灌流至120min,取下心脏。心脏以TTC染色,用计算机图像分析软件计算心肌梗死面积;实验结束后,通过生物化学方法测定心肌组织中超氧化物歧化酶(Superoxidase dismutase,SOD)活性及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量。
结果:
(1)与Control大鼠相比较,Emodin预处理可明显改善大鼠心脏缺血/再灌注后心功能的恢复。给予离体心脏30min缺血和60min再灌注后,Emodin组LVDP、+LVdp/dtmax和-LVdp/dtmax分别为49.0±2.9 mmHg(恢复率42.4±5.2%),1230.4±101.9 mmHg/s(恢复率36.7±4.6%)和-910.1±73.9 mmHg/s(恢复率40.8±2.0%),相比Control组的21.8±2.2 mmHg(恢复率17.9±1.4%),436.8±72.8 mmHg/s(恢复率13.6±2.2%)和-363.5±60.5 mmHg/s(恢复率16.5±2.4%)均有显著升高(P<0.01);而LVEDP为43.7±8.4mmHg,明显低于对照组的67.2±2.1mmHg(P<0.01)。 Emodin大鼠的CF为5.8±0.5ml/min,明显好于Control的4.2±0.1 ml/min(P<0.05);Emodin+Gli及Emodin+5-HD大鼠CF分别为3.7±0.4ml/min和4.3±0.4ml/min,均低于Emodin大鼠,具有统计学差异(P<0.05),而与Control大鼠无差异。结果表明,Emodin预处理可明显促进缺血/再灌注心脏功能的恢复。Emodin对心脏缺血/再灌注心脏功能的保护作用可被非特异性ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channel,KATP)阻断剂格列本脲完全消除,亦可被线粒体特异性KATP阻断剂5-HD大部分阻断。
(2)再灌注后5min及60 min时,Emodin大鼠冠脉流出液LDH含量为1165.3±191.0 U/L和675.0±96.1 U/L,均明显低于Control大鼠的1782.8±84.2 U/L和997.5±92.5U/L(P<0.05), Emodin+Gli组和Emodin+5-HD组各时间点LDH与Control组比较均无显著差异(P>0.05)。结果表明,Emodin预处理明显减轻缺血/再灌注损伤对心肌的损伤。Emodin抗心肌损伤的保护作用可被格列本脲和5-HD所消除。
(3)再灌注后120min时,Emodin大鼠心肌梗死面积为29.4±3.7%,明显低于Control大鼠69.1±3.4%(P<0.01),Emodin+Gli组和Emodin+5-HD组则分别为67.4±5.9%和63.6±5.8%,与Control组比较无明显差异(P>0.05)。结果表明,Emodin预处理能显著减小缺血/再灌注造成的心肌梗死,此作用可被格列本脲和5-HD所消除。
(4)再灌注后120min,Emodin大鼠心肌SOD含量为345.2±41.0U/mgprot,相比Control大鼠的247.3±29.8 U/mgprot显著升高(P<0.05);MDA含量为4.7±0.2 nmol/mgprot,相比Control大鼠的6.0±0.8nmol/mgprot明显降低(P<0.05)。结果表明,Emodin预处理可增强心肌抗氧化能力。
结论:Emodin可明显改善心肌缺血/再灌注损伤,此作用可能通过增强心肌的抗氧化能力、激活开放细胞膜与线粒体膜ATP敏感钾通道所实现。