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目的：研究蟾灵膏对结直肠癌LOVO-luc细胞建立的原位BALB/c裸鼠模型移植瘤的生长和肝脏转移作用，并探讨其对SDF-1/CXCR4信号通路及其相关因子HIF-1α、VEGF、PI3K、Akt、MMP-2、collagenⅣ蛋白表达的影响，从而为结直肠癌的中医药防治寻求新的药物。 方法：采用脂质体将携带荧光素酶基因的PGL4.51质粒转染到人结直肠癌细胞株LOVO中，经G418筛选出稳定表达荧光素酶的单克隆细胞株;收集对数生长期的LOVO-luc细胞，调整浓度为2×106/ml，取0.2ml细胞悬液接种于BALB/c裸鼠右前肢腋皮下，建立皮下移植供体瘤;再通过外科手术将皮下移植瘤移植到裸鼠结肠，建立结直肠癌裸鼠模型。造模7d后，在荧光影像系统IVIS Spectrum下观察移植肿瘤发光情况，并随机将24只模型裸鼠分为模型组(Model)，卡培他滨组(Capecitabine)、蟾灵膏低(CLGL)、高剂量组(CLGH)，每组6只。Model组予以生理盐水0.2ml/次/d灌胃;Capecitabine组予以0.359g/kg的卡培他滨溶液0.2ml/次/d灌胃，连续给药5d，停药2d，为1疗程，连续用药3个疗程;CLGL组、CLGH组分别予以1.52g/kg、6.06g/kg的蟾灵膏水溶液0.2ml/次/d灌胃，连续给药3周。每天观察受试裸鼠的一般情况，并每间隔两天测量一次体质量，分别于造模后7、14、21、28d时在体外荧光影像系统IVIS Spectrum下观察移植肿瘤生长、转移情况。实验终点，摘眼球法取受试裸鼠的血液;剥离移植瘤，并对其进行称量及测量体积的大小;体视镜下观察裸鼠肝脏转移情况，并记录移植瘤在肝脏中转移灶的数目。HE染色检测裸鼠肝脏标本中移植瘤的转移情况。Western blot法检测移植瘤中HIF-1α、SDF-1α、CXCR4、PI3K、Akt蛋白的表达水平，以及PI3K、Akt蛋白磷酸化的活性情况。ELISA法检测裸鼠血清中VEGF，移植瘤中VEGF、MMP-2、collagenⅣ和肝脏组织中SDF-1α、CXCR4蛋白的表达水平。免疫组化法检测移植瘤中HIF-1α、SDF-1α、CXCR4蛋白和肝脏中SDF-lα、CXCR4蛋白的阳性表达情况。 结果：建立了稳定表达萤火虫荧光素酶的结直肠癌细胞株LOVO-luc，并用于裸鼠原位移植模型的发光检测。利用活体荧光成像系统IVIS Spectrum对裸鼠体内移植瘤的动态变化进行量化成像，造模7d后，IVIS成像见裸鼠结肠周围有荧光发光。分组干预后，每7d一次的成像结果显示，裸鼠体内发光部位由结肠周围向腹腔扩散，发光强度随时间逐渐增长，与Model组对比，分别在第14、21、28d时候，Capecitabine组、CLGH组均显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，CLGL组有降低趋势，但没有统计学差异(P＞0.05)。裸鼠体质量方面，与Model组对比，CLGH组裸鼠体质量明显增加(P＜0.05)，Capecitabine组裸鼠体质量明显减轻(P＜0.05)。与Capecitabine组比较，CLGL组、CLGH组裸鼠体质量均明显增加(P＜0.05);CLGL组与CLGH组比较，CLGH组体质量显著增加(P＜0.05)。在裸鼠移植瘤的质量、体积方面，Capecitabine组、CLGL组、CLGH组移植瘤的质量、体积与Model组比较均显著减小，差异具有统计学意义(P＜0.05);与Capecitabine组比较，CLGL组明显增加，差异具有统计学意义(P＜0.05);Capecitabine组与CLGH组，CLGL组与CLGH组比较，无论是对肿瘤质量的抑制，还是对肿瘤体积的抑制，均无统计学意义(P＞0.05)。各组裸鼠移植瘤质量的抑瘤率分别是：Capecitabine组(63.32％)、CLGL组(35.26％)、CLGH组(46.81％);肿瘤体积抑瘤率分别是：Capecitabine组(65.63％)、CLGL组(36.27％)、CLGH组(47.09％)。体视镜观察及HE结果证实，Model组的6(6/6)只裸鼠均发生肝转移，Capecitabine组有3(3/6)只发生肝转移，CLGL组有5(5/6)只发生肝转移，CLGH组有3(3/6)只发生肝转移。对移植瘤肝脏转移灶统计发现，与Model组比较，Capecitabine组、CLGH组裸鼠肝脏移植瘤转移数目显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。Western blot检测显示，与Model组比较，HIF-1α蛋白在Capecitabine组、CLGL组、CLGH组裸鼠移植瘤中的表达水平均显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05);Capecitabine组、CLGH组裸鼠移植瘤中SDF-1α、CXCR4、PI3K、Akt蛋白的表达水平显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，并且PI3K、Akt蛋白的磷酸化活性在Capecitabine组、CLGH组也显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。与Capecitabine组比较，CLGL组移植瘤组织中CXCR4、PI3K、Akt蛋白的表达显著增高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。与CLGL组比较，CLGH组移植瘤组织中的CXCR4、PI3K、Akt蛋白显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。Capecitabine组与CLGH组比较，移植瘤中HIF-1α、SDF-1α、CXCR4、PI3K/P-PI3K、Akt/P-Akt蛋白的表达水平均无统计学差异(P＞0.05)。ELISA检测显示，与Model组比较，Capecitabine组、CLGH组裸鼠移植瘤中、血清中的VEGF蛋白表达水平均显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。与Model组比较，Capecitabine组、CLGH组裸鼠移植瘤中MMP-2蛋白的表达水平显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。同样，我们的ELISA结果还表明，与Model组比较，Capecitabine组、CLGH组裸鼠移植瘤中collagenⅣ蛋白的表达水平显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.05);与Capecitabine组比较，CLGL组显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。肝脏组织的ELISA结果表明，Capecitabine组、CLGH组裸鼠肝脏组织中SDF-1α、CXCR4蛋白的表达水平较Model组显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，Capecitabine组与CLGH组、CLGL组与CLGH组比较，均无统计学差异(P＞0.05)。移植瘤的免疫组化结果显示，HIF-1α、SDF-1α、CXCR4蛋白在Model组均呈强阳性表达，在Capecitabine组和CLGH组呈弱阳性表达，在CLGL组呈阳性表达。肝脏组织的免疫组化结果显示，SDF-1α、CXCR4蛋白在肝脏组织的移植瘤区域明显高于对应的癌旁组织，且在Model组呈强阳性表达，在Capecitabine组、CLGH组呈弱阳性表达，在CLGL组呈阳性表达。 结论：1.蟾灵膏高剂量有改善LOVO-luc细胞建立的结直肠癌BALB/c裸鼠模型体质量的作用;2.蟾灵膏高剂量有抑制模型裸鼠移植瘤生长的作用;3.蟾灵膏高剂量有抑制模型裸鼠移植瘤肝脏转移的作用;4.蟾灵膏高剂量可抑制模型裸鼠移植瘤中HIF-1α、SDF-1α、CXCR4、MMP-2、VEGF、PI3K、Akt蛋白水平的增加;5.蟾灵膏高剂量可抑制裸鼠模型移植瘤中collgenⅣ蛋白的降解;6.蟾灵膏高剂量可抑制裸鼠模型移植瘤中PI3K、Akt蛋白磷酸水平;7.蟾灵膏高剂量可抑制裸鼠模型血清中VEGF蛋白释放;8.蟾灵膏高剂量可抑制裸鼠模型肝脏中SDF-1a、CXCR4蛋白表达的升高。因此，我们本次研究表明，蟾灵膏高剂量可以显著抑制CRC裸鼠原位模型移植瘤的生长和肝脏转移，以及改善裸鼠体重，其作用可能与抑制HIF-1α/SDF-1α-CXCR4/PI3K-Akt信号通路，减少VEGF的合成和释放，减轻MMP-2对collgenⅣ的降解有关。