本试验利用PCR技术从猪细小病毒S-1株中成功扩增了VP2和NS1基因的片段,然后将PCR产物分别克隆至载体pET32c,构建了的重组质粒pET32c-VP2和pET32c-NS1原核表达载体。经双酶切和测序分析鉴定,结果表明重组表达质粒构建正确可靠。含有猪细小病毒结构蛋白VP2基因的重组质粒,转入表达宿主菌BL21中,IPTG进行诱导表达。确定IPTG终浓度为0.3-0.6mmol/L,37℃培养6h时表达量最佳。SDS-PAGE电泳结果显示,重组VP2蛋白获得高效表达,且以包涵体形式存在。Western-Blot显示有良好的免疫原性。变性、复性后回收率较低为30%。Ni2+树脂进行层析纯化,纯化后的蛋白浓度为0.63 mg/ml,纯度达75%。确定NS1优化表达的条件为IPTG终浓度为0.3-0.6mmol/L,20℃培养16h时表达效果好,且减少了包涵体的形成。Western-Blot显示有良好的生物活性。纯化后计算得浓度为0.50 mg/ml。纯化后的重组蛋白作为抗原,分别包被酶标板,通过优化ELISA反应条件,最终确定VP2、NS1包被浓度分别为3.1μg/ml、2.5μg/ml,血清稀释1:100、酶标二抗稀释度1:8000、血清和酶标二抗温育1h时效果最好。优化的最佳反应条件,建立的间接VP2-ELISA和NS1-ELISA分别检测6份阴性血清,将结果统计处理,确定阳性标准为OD待检血清≥0.5且OD待检血清/OD标准阴性值≥2.1。试验结果表明,建立的间接VP2-ELISA和NS1-ELISA特异性、敏感性效果较好。VP2-ELISA可以用于猪群疫苗正常免疫之后抗体水平高低的监测。NS1-ELISA且能很好的区别灭活疫苗免疫猪和自然感染猪。