甘菊Chrysanthemum lavandulifolium(Fisch.ex Trautv.)Makino属菊科多年生草本植物,是菊花起源的重要亲本之一,植株为二倍体,相对于大多数多倍体、非整倍体、遗传背景复杂的菊花来说其遗传背景相对简单,且与菊花一样属于典型的短日照植物,因此可将其作为菊属植物分子生物学研究的理想模式植物。　　 LEAFY(LFY)基因在植物由营养生长转向生殖生长的过渡阶段发挥重要作用,包括整合多条成花诱导途径信号,启动花分生组织的形成;同时还能够激活花器官特异性基因。DFL基因是甘菊中LFY的同源基因,它对甘菊成花可能起着重要的作用。本研究分析了甘菊LFY同源基因DFL内源表达模式,进行了甘菊DFL转基因植株鉴定及DFL(反义)基因的转化研究,并获得花期改良的植株,借此推断OFL基因在甘菊开花过程中具有重要功能。　　 主要研究结果如下:　　 1.分离甘菊顶端分生组织中总RNA,使用RT-PCR技术,分析甘菊成花过程中内源DFL基因在甘菊茎端的表达情况发现,对甘菊进行12小时短日照诱导约一周左右,DFL基因在顶端分生组织转变至花器官原基形成时表达水平遵循先升高后降低再升高的模式;在花器官发育阶段,DFL基因在花透色阶段、舌状花露出花苞片时期及花初开期有表达,其中花透色阶段表达较强。这一研究结果表明,DFL基因表达规律与甘菊成花过程密切相关。　　 2.设计正交试验对甘菊遗传转化体系中4个因素(预培养时间、菌液浓度、侵染时间和共培养时间)在4个水平上进行优化,每个处理组合重复3次,每次每个处理侵染叶盘30个,共侵染2000个叶盘,在设定范围内筛选出了最佳遗传转化体系;外植体预培养2d,菌液浓度OD值为0.8,侵染时间为20min,共培养4d。　　 3.应用PBI121-ADFL载体,使用农杆菌介导叶盘转化法进行转化试验,将DFL(反义)基因导入甘菊中。研究结果表明,使用浓度为300-400mg/L的羧苄青霉素(Garb)作为抑菌剂,在含有5mg/L卡那霉素的筛选培养基中培养,待长出芽后转移至生根培养基中培养,获得到37株为Kan抗性植株,PCR检测结果发现8个阳性株系,RT-PCR检测表明其中三个株系的内源DFL基因表达水平有所降低。　　 4.对转DFL基因的甘菊植株进行RT-PCR检测的结果发现,在未转化植株根部检测不到DFL基因表达信号,在转化株系D4根部也没有检测到外源DFL基因表达信号,在D5、D6、D7、D8、D9株系根部则检测到DFL基因表达信号,但不同植株的表达量不同。将转基因T1代种子通过抗生素筛选,扩繁后移栽培养,对其生长发育情况及花期变化观察结果表明,T1代部分转化株系花期相对于未转基因植株提前,其他表型基本没有发生变化。　　 上述研究结果表明,甘菊DFL基因能够促进甘菊提前开花,有望将其用于菊花开花期改良的分子育种实践中。