论文部分内容阅读
无花果果实皮薄无核,肉质松软,风味甘甜,还具有很高的营养价值和药用价值,尤其是它的抗癌功效已得到了世界各国的公认。目前我国无花果栽培面积迅猛增长,产量迅速提高,加之果实采收期比较集中,采后又极不耐贮运,常温条件下1~2d即软化、褐变、风味下降以致腐烂,给贮藏、加工、运输等带来极大的困难,严重影响了其经济效益。利用现代转基因技术可望从根本上解决无花果软化问题,而无花果的组织培养与植株再生是利用生物技术获得耐贮运无花果研究中的重要一环。本研究以波姬红无花果的幼嫩芽体为外植体,对无花果的组织培养与叶片植株再生进行了较为系统的研究,以期为通过转基因生物技术抑制无花果的软化奠定基础。主要研究结果如下:1.无花果的初代培养结果表明,外植体取材时的气候条件和消毒方法都与接种的污染率密切相关,Vc浓度则明显的影响了无花果接种的褐化率。连续晴天的天数越长,染菌率越低,连续晴天10d以上时,染菌率为46.2%,与雨后采集和连续晴天5d采集差异极显著;抗褐化效果在一定范围内随着Vc浓度的增高而越发明显,当其浓度为1500mg/L时,与Vc浓度为1000mg/L和2000mg/L差异均不显著,但与Vc浓度为500mg/L时差异显著,因此从经济和效果双重考虑,选择Vc浓度为1000~1500mg/L;与0.1%HgCl2消毒8~10min和2%的NaClO消毒5~7min相比,2%的NaClO消毒5min+0.1%HgCl2消毒5min能起到较好的消毒效果,染菌率为36.2%,与其它两种方法差异显著。2.无花果的继代培养结果表明,基础培养基和激素种类对芽体分化和幼芽的伸长有很大影响。当6-BA浓度为0.5mg/L时,组培苗太细弱,不易成活,当6-BA浓度为2.0mg/L时,苗会出现玻璃化状态,也不予以考虑。当6-BA浓度为1.5mg/L时,NAA浓度为0.1mg/L和0.2mg/L时,苗的增殖率差异不显著,与其他处理差异均显著;当6-BA浓度为1.0mg/L时,NAA浓度为0.2mg/L和NAA浓度为0.1mg/L,增殖芽平均高度差异不显著,和不添加NAA差异显著。综合考虑,将初代培养成活后的幼芽接种于MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1~0.2mg/L培养基中,有助于芽体的分化,将幼芽接种于MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1~0.2mg/L培养基中有助于芽体的伸长,两种培养基交替接种,可得到大量的无菌苗。3.对无花果叶片愈伤组织的诱导结果表明,基础培养基、TDZ浓度、所接种叶片的叶龄、部位、接种方式及切块大小都对愈伤组织的诱导有很大影响,将叶龄为30~35d的叶片叶基处4mm×4mm大小的叶块正放接入含有TDZ1.0~1.5mg/L,NAA0.05mg/L的1/2MS基础培养基中时,在叶片内部接触到培养基的部位尤其是叶脉部位以及切口周围靠近培养基的部位生成大量疏松的愈伤组织,这样的愈伤组织多为浅绿色,少部分为白色絮状,活性强。4.对无花果愈伤组织分化为不定芽的结果表明,6-BA浓度为愈伤组织能否分化为不定芽的关键。当不添加6-BA时,愈伤组织不分化,只是继续增大;6-BA浓度大于6mg/L时,愈伤组织几乎不分化,且随着培养时间的延长,愈伤组织逐渐褐化死亡。将愈伤组织接入6-BA浓度为3mg/L的MS培养基中不定芽分化率较高,分化率高达69.5%,与其他处理差异均显著,分化生成的不定芽为鲜绿色,芽较粗壮。5.不定芽生根培养的结果表明,将不定芽在100mg/L的IBA溶液中浸泡10min后接种于1/2MS培养基中或将不定芽接种于IBA浓度为1.0mg/L的1/2MS培养基中生根效果较好,生根率分别为80.5%、79.5%,平均每株不定芽的生根数分别为4.8、4.7,生成的根为白色,长短粗细均匀,成活率高。