目的:H3N2型流感病毒常不定期的引起不同程度的爆发流行,因该病毒的高变异性,目前的疫苗株对已发生抗原突变的病毒株不能产生有效的保护。通过对2010～2015年杭州地区甲型流感H3N2进行分子流行病学调查,实现对该病毒菌株的分子变化进行监测,并为疾病的防控提供可靠的科学证据。方法:1.2010年1月至2015年9月浙江大学附属第一医院流感监测网络相关数据,各年度流感样病例分别为:2406例、995例、766例、1156例、1928例和404例。分别采用研究试剂所有病例的咽拭子均分离到H3N2流感病毒,并经过血凝抑制实验和流感病毒核酸监测证实。2.参考A/NewYork/392/2004(H3N2)毒株,设计扩增H3N2各个片段的全编码区序列引物,通过PCR的方法对疑似患者进行扩增测序;3.序列收集:所有 H3N2 的 HA(hemagglutinin)与 NA(neuraminidase)基因完整序列均在GISAID及NCBI上搜索查找获取。在GISAID数据库上搜索关键词分别为:"H3N2","Asia","China","Hangzhou","HA";或"H3N2","Europe","Switzerland","HA";"H3N2","North America","United States","texas","HA";"H3N2","Oceania","Australia","Victoria","HA";在 NCBI 数据库中的"Nucleotide"中搜索"H3N2","HA","NA",并查找"hangzhou";4.HA与NA基因序列筛选与比对:依据病毒的分离地、时间、宿主为前提条件进行整合,条件相同序列只取一条。H3N2基因序列按照地区分为杭州及WHO推荐的 2013/2015 年流行疫苗株 A/TEXAs/50/2012(H3N2)、2013/2014 年流感疫苗株 A/Victoria/361/2011 和 2015/2016 疫苗株 A/Switzerland/9715293/2013 E5 3 作为参考毒株的HA和NA两组。分组的序列分别用软件Clustal X(v1.8)进行比对、分析、剪切对齐。序列比对完成后,直接运用Mega(v5.2)软件,采用Neighbor-joing法进行系统进化树分析。用FigTree软件对图形进行编辑。结果:1.2010～2015年杭州地区H3N2亚型的核酸阳性人数分别为73、42、40、33、62、30,H3N2 亚型核酸阳性率分别为 3.03%、4.22%、5.67%、2.85%、3.77%、4.34%。2.2010～2015年杭州地区H3N2感染率分析,不同年度间H3N2感染率差异具有统计学意义(χ2=26.266,P<0.05),不同性别和年龄组间差异无统计学意义(χ2=7.168,χ2=12.954,P>0.05)。3.2015年HA序列分析结果表明,该年度没有形成新的病毒。4.通过对2010～2013年的NA序列进行分析,发现该序列高度保守。结论:2010～2015年杭州甲型流感病毒(H3N2)占流感总阳性的46.9%,且绝大多数的病毒株属于3C组。每年的冬春季节为杭州市H3N2流感流行期。由于3c.2和3c.3a病毒株间很少有抗原交叉,因此分支3c.3a中疫苗株A/Switzerland/9715293/2013参考株可能无法提供针对流行组3c.2病毒所需的保护。2015年1月～9月病毒株研究结果显示,2015年分离株抗原决定簇在A区和B区有多个位点发生了变异,虽未形成新的亚型,但其他位点的变异正在加强。本文对2010年～2013年杭州H3N2亚型流感病毒NA基因的序列进行测定,该基因的进化路径主要是以一进化主干伴随着多侧支的方式进化。但2012～2013年的毒株在进化树上没有循序渐进的过程,进化呈现跳跃的方式,同一年代毒株可分为几个分支同时存在,这些分支在进化树上的位置有高有低,进化中由于免疫压力和病毒自身进化因素的影响,某些分支会成为进化的主流。以往研究表明,NA的酶活性中心氨基酸是病毒和受体相互作用的主要因素,该中心位点序列是高度保守的,与病毒的繁殖能力有着直接的关系。本研究也证实了NA的酶活性中心位点是高度保守的。作为NA抑制剂药物作用的位点,它的保守也意味着杭州2010～2013年间在基因序列上没有发现耐药毒株。