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目的:在我国所有恶性肿瘤当中,肺癌最常见,其按组织学类型及生物学特性可大体分为两种,即小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。临床中最常见的肺癌类型是NSCLC,约占肺癌总数的80%~85%。因为肺癌起病十分隐匿,而且肺癌在早期的时候缺乏明显的特异性症状,同时容易发生淋巴、血行转移,所以肺癌在确诊的时候大多数患者已进入中晚期阶段,治疗效果及预后均不佳。既往的肺癌病人使用手术、放疗和化疗的方法治疗,效果不佳。近年来靶向治疗以及免疫治疗逐渐被人们应用于临床并取得很不错的效果,但由于药物耐药等各种原因,肺癌的五年生存率仍然比较低,总体预后仍然较差。肺癌的发病因素及发展机制是复杂的,虽说越来越多的研究在不断的探索和验证,但其具体的机制目前尚未能明确,肺癌的预防和治疗仍然比较困难。为了有效预防肺癌以及治疗肺癌,提高肺癌患者的生存率及生活质量,我们的研究重点是需要不断的努力探索肺癌的发生以及发展的具体机制,以求能够在这一具体的机制上寻求能够阻止肺癌的关键的靶点。然后我们能够根据这些靶点设计相关的诊断手段和治疗手段,从而有效抑制肺癌的发生和发展。我们在前期的研究中运用基因富集等生物信息学方法,在基因芯片数据库中筛选出与NSCLC发生、发展密切相关的关键基因之一即肌球蛋白调节轻链9(myosin regulatory light chain 9,MYL9)基因。为了进一步明确MYL9基因的生物学功能,故本研究通过应用RNA干扰技术沉默NSCLC H1299细胞株中的MYL9基因,并检测MYL9基因对H1299细胞的增殖、迁移的作用。探索MYL9基因对H1299细胞株增殖、迁移的影响,探究潜在的靶向治疗肺癌新靶点。方法:(1)慢病毒转染及沉默MYL9基因稳定细胞株建立:实验细胞为NSCLC H1299细胞,本实验设三个组,分别为对照组、阴性对照组和敲减组。转染pSLLV-U6-zsGreen-puro–MYL9病毒沉默MYL9基因的H1299细胞为敲减组(knock down,KD组),同时设立转染pSLLV-U6-zsGreen-puro-NC空载病毒的H1299细胞为阴性对照组(negative control,NC组),以不进行转染操作的H1299细胞为对照组(control,CON组);(2)应用实时荧光定量PCR检测MYL9 mRNA表达水平;(3)采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测H1299细胞的增殖能力;(4)应用划痕实验观察H1299细胞的迁移能力。结果:(1)本次研究成功构建了沉默MYL9基因的H1299稳定细胞株和转染空载病毒的H1299稳定细胞株;(2)实时荧光定量PCR检测MYL9基因mRNA的表达水平,检测结果显示KD组MYL9基因的mRNA表达量最低,显著低于CON组及NC组,差异有统计学意义(均P<0.05);(3)MTT法分别测定24h、48h、72h、96h、120h各组细胞的增殖情况,细胞生长曲线显示,各组细胞随着时间的推移均呈现上升趋势,其中KD组第24h、48h、72h、96h、120h的A值均低于CON组和NC组,差异具有统计学意义(均P<0.05),提示KD组细胞的增殖能力明显降低;(4)划痕实验中CON组、NC组、KD组在24h的划痕面积愈合率为(33.98±0.89)%、(21.68±1.12)%、(8.47±2.01)%,在48h的划痕面积愈合率为(83.75±3.25)%、(82.51±13.64)%、(28.43±2.12)%,KD组细胞在24h、48h划痕面积愈合率明显低于CON组和NC组,差异有统计学意义(均P<0.05)。提示KD组细胞的迁移能力明显降低。结论:本实验成功构建了沉默MYL9基因的慢病毒载体,成功转染H1299细胞,并可在H1299细胞中稳定表达,证实沉默MYL9基因能够在体外抑制NSCLC细胞增殖,阻滞NSCLC细胞的迁移。本研究在肺癌的增殖、转移上提供了新的思路,并有可能为肺癌的治疗提供新的靶点。