缢蛏多糖的分离纯化与生物学功能研究

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缢蛏(Sinonovacula constricta)是我国北方重要的海水养殖贝类。本论文以缢蛏为原料,从缢蛏中提取、分离、纯化得到缢蛏多糖,分析测定缢蛏多糖的结构及理化性质,在此基础上对其抗氧化、保肝降血脂活性进行初步的研究,实验结果为缢蛏的有效开发和综合利用提供基础数据,结果如下:
  1.优化缢蛏多糖的提取工艺:在单因素试验基础上,选择时间、液料比及温度为自变量,多糖提取率为响应值,利用响应面法试验设计得到了缢蛏多糖提取率与液料比、时间和温度关系的回归模型。优化出热水浸提法提取缢蛏多糖的最优条件为:料液比1∶1.97、浸提温度81.2℃、浸提时间3.09h。按此工艺,缢蛏多糖的提取率可达0.427%。
  2.在最优条件下大量制备缢蛏多糖粗品,通过等电点除蛋白,采用SephadexG-100葡聚糖凝胶柱层析法对缢蛏多糖粗品进行纯化,得到纯化样品。用高效液相色谱对纯化品进行分子量测定,约为483KDa。通过红外光谱对纯化品进行分析,发现其具有酸性多糖的特征吸收。采用PMP柱前衍生HPLC法分析单糖组成,发现缢蛏多糖主要有葡萄糖组成。进行核磁共振色谱分析可知,缢蛏多糖颗粒具有规则的椭球型结构,多糖分子间不容易发生缔结。
  3.体外抗氧化活性的测定选用清除超氧阴离子自由基能力、羟基自由基能力、DPPH自由基能力、ABTS自由基能力四个指标。当缢蛏多糖浓度为10mg/ml时,对羟基自由基的清除效果最明显最高,清除率为91.71%;在相同浓度下,缢蛏多糖对超氧阴离子自由基的清除率最大值达到33.71%,对DPPH自由基的清除率最大值达到95.46%,对ABTS自由基的清除率最大值达到80.73%。结果表明,缢蛏多糖具有较好的体外抗氧化活性,且在实验设定的浓度范围内,表现出剂量依赖性。
  采用急性肝损伤动物模型实验方法考察缢蛏多糖的保肝活性,三个剂量组为50、200、800mg/kg?d,联苯二甲酸二甲酯作为阳性对照。14d后检测血清中ALT、AST、SOD、MDA含量。结果表明:缢蛏多糖对CCl4所致小鼠急性肝损伤有明显的抑制作用,缢蛏多糖低、中、高剂量组均能显著降低肝损伤小鼠血清中的ALT、AST、MDA水平(p<0.05或p<0.01),即表明缢蛏多糖对肝损伤小鼠具有较好的保肝作用。
  采用高血脂动物模型实验方法考察缢蛏多糖的降血脂活性,三个剂量组为50、200、800mg/kg?d,辛伐他汀作为阳性对照。28d后检测血清中HDL、LDL、TC、TG含量。结果表明:缢蛏多糖对高脂小鼠的血脂升高有抑制作用,防止脂质沉积,具有降低血脂的作用。
  4.以苹果醋为原料,以感官评分为指标,通过单因素和响应面优化实验,添加缢蛏多糖制备出缢蛏多糖苹果果醋,实验结果如下:经响应面实验研制出缢蛏多糖苹果果醋的最佳配方为:多糖添加量0.2%、柠檬酸添加量0.25%、蜂蜜添加量10%,经验证试验,研制出的缢蛏多糖苹果果醋果香浓郁、色泽金黄、酸甜可口,感官评分80.5。
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